川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元Bcl-XL 基因表达的影响.docVIP

川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元Bcl-XL 基因表达的影响 【摘要】 目的：通过免疫组织化学方法来探讨川芎嗪(TMP)对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Bcl-XL基因表达的影响。方法： 使用青霉素致痫大鼠模型, 采用BL-410生物机能实验系统记录双侧大脑皮层痫样放电, 待癫痫样放电稳定后, 腹腔注射不同剂量的TMP, 待其抑制作用最明显时, 取大脑切片,采用免疫组织化学方法观察大脑神经元内Bcl-XL基因表达的变化，利用 计算 机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织Bcl-XL 基因表达的平均光密度和平均阳性面积。结果： A组(手术对照组)与B组(青霉素致痫组)、C 组(TMP10mg·kg-1 治疗 组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P＜0.01)，A 组(手术对照组)与D组(TMP20mg·kg-1治疗组)、E组(TMP40mg·kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05），B 组(青霉素致痫组)与C组(TMP10mg·kg-1治疗组)之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05），D组(TMP20mg·kg-1治疗组)与E组(TMP40mg·kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05）。结论： TMP可抑制青霉素致痫大鼠大脑神经元的凋亡，从而对神经元起了重要的保护作用。 【关键词】 川芎嗪 癫痫放电 神经元 青霉素 Bcl-XL基因 细胞凋亡(apoptosis) 是正常器官发育和组织稳态过程中一种固有的细胞死亡形式,也可由多种因素包括糖皮质激素、高温、一定的化疗药物和电离辐射等诱导产生。细胞凋亡同细胞的增殖与分化一样, 离不开基因的表达与调控, 目前发现许多基因参与细胞凋亡的调控, 在哺乳动物细胞大致分为三类:一类为促进凋亡; 另一类为抑制凋亡; 还有一类为双向调控, 如c-myc、Bcl-x,Bcl-x 可翻译出两种蛋白Bcl-XL 和Bcl-XS, 前者抑制凋亡,后者促进凋亡。原癌基因和抑癌基因是参与细胞维持自稳平衡(homeostosis)的正负调控信号, 共同调节细胞增殖、分化和凋亡［1~3］。 川芎为伞形科蒿本属植物, 它具有活血化淤、疏风止痛、理气的作用［4］。川芎嗪(ligustrazine)是中药川芎的有效成分之一,属酰胺类生物碱,化学结构为四甲基吡嗪, 化学结构为四甲基吡嗪( tetramethylpyrazine,TMP)。TMP可抑制海马神经元的放电活动, TMP可明显抑制吗啡依赖大鼠戒断症状及体重下降［5，6］,大剂量TMP对缺血、缺氧性脑损伤、海马CA1神经元的缺血性损伤有改善或保护作用。TMP已被广泛应用于心、脑血管闭塞性疾病的治疗。 本课题采用免疫组织化学方法、图像分析技术检测了TMP对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Bcl-XL基因表达的平均光密度及阳性面积率的变化影响, 并进一步探讨其作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 　　SD大鼠(由武汉大学医学院实验动物中心提供) , 雌雄不拘, 体重200～ 250g。 　　1.1.2 实验药品及试剂 　　盐酸川芎嗪注射液( 批号0107001 ) , 常州制药厂生产；注射用青霉素钠( 批 , 华北制药股份有限公司生产。 　　1.1.3 实验仪器 　　BL-410 生物机能实验系统, 成都泰盟 电子 有限公司生产；江湾I-C型立体定向器, 第二军医大学器材处生产。 　　1.2 方法 　　1.2.1 癫痫动物模型 　　实验选用健康SD 大鼠, 用10% 乌拉坦以10m l·kg-1体重腹腔注射( ip ) 麻醉, 将动物固定在江湾I-2C 型立体定向器上,于大脑左、右两侧前卤后3mm , 矢状缝旁开3mm 行开颅手术, 暴露大脑皮层记录区域(2mm ×2mm),将银球电极置于左、右两侧的记录部位,信号输入置BL-410 生物机能实验系统, 进行左、右两侧脑电记录。用浸有青霉素溶液的明胶海绵(200u/mm3)置于左侧大脑皮层表面, 诱发大鼠大脑皮层癫痫样放电, 待癫痫放电稳定后, 移去明胶海绵, 用浸有温热生理盐水棉球盖住创口。 　　1.2.2 试验分组及取材 　　将实验大鼠随机分为5组, 每组8只: A 组(手术对照组) , 麻醉开颅手术1h后取大脑; B组(青霉素致痫组),青霉素诱发癫痫1h后取大脑； C组(TMP10mg·kg-1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射 (TMP10mg·kg-1),待抑制作用最明显时取大脑； D组(TMP20mg·kg-1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后, 再腹腔注射(TMP20mg