RAPD分子标记的实验原理及操作流程.docVIP

RAPD分子标记的实验原理及操作流程 RAPD标记原理 RAPD技术的全称是随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)，此技术建立于PCR基础之上，使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物，对基因组的DNA全部进行PCR扩增，以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列，因此须对每一随机引物单独进行PCR，单一引物与反向重复序列结合，使重复序列之间的区域得以扩增。引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间DNA碱基的缺失、插入或置换均可导致扩增片段数目和长度的差异，经琼脂糖凝胶电泳分离后通过EB染色以检测DNA片段的多态性。 ? 一、实验材料 ?? 不同来源的DNA(30-50ng/ul)。 二、实验设备 ??PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml?eppendorf管，电泳装置，凝胶成像仪。 三、试剂 1、RAPD引物：购买成品RAPD引物序列合成。 2、Taq酶 3、10xPCR?缓冲液 4、MgCl2：25mmol/L。 5、dNTP：2.5mmol/L。 四、操作步骤： ? ?1.?在15ul反应体系中，加入 模板DNA?1ul?(30-50ng) RAPD引物?1ul?(约5pmol) 10xPCR?Buffer?1.5ul MgCl2??1ul dNTP??1ul Taq酶?0.5单位（U） 加ddH2O?至?15