恒温实时荧光法检测金黄色葡萄球菌.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2013, Vol.29, No.9 恒温实时荧光法检测金黄色葡萄球菌 1 2 3 3 3 刘羽霏 ，叶蕾 ，孟赫诚 ，闫鹤 ，石磊 (1.华南农业大学食品学院，广东广州 510642) (2.广州迪澳生物科技有限公司，广东广州 510663) (3.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州 5106403) 摘要：恒温实时荧光技术是目前最新颖的核酸扩增方法。本文创建了恒温实时荧光法快速检测微生物技术方法并应用于金黄色 葡萄球菌(Staphyloccocus aureus ) 的快速检测。本研究针对金葡菌特异序列nuc 设计6 条引物，选取常见病原菌标准株为对照品进行 引物特异性检测；选取金葡菌标准菌株进行灵敏度检测；并且利用食品中分离的金葡菌，同时进行LAMP 反应和荧光PCR 实验，验 证LAMP 反应的检出率，结合ESEQuant tube scanner 进行实时检测。结果显示：所建立的恒温荧光扩增法具有扩增效率高、特异性 2 强、灵敏度高（灵敏度为10 CFU/mL）等优点。对50 食品中分离的金葡菌进行检测，恒温荧光法检测出50 株，荧光PCR 的方法检 测出50 株，两种方法的检出率都为 100%。本文引入的ESE Quant tube scanner 平台结合恒温实时荧光法检测金葡菌不仅操作简单， 便于携带，同时实现检测过程的数据化及自动化，适合金葡菌的现场检测和大规模监控。 关键词：金黄色葡萄球菌；环介导等温扩增 文章篇号：1673-9078(2013)9-2262-2266 Detection of Staphyloccocus aureus by Real Time Fluorescence Isothermal Amplicication 1 2 3 3 3 LIU Yu-fei , YE Lei , MENG He-cheng , YAN He , SHI Lei (1.South China Agriculture University, GuangZhou 510642, China) (2.GuangZhou Deaou Biotechnology CO,. LTD, GuangZhou 510663, China) (3.South China University of Technology, GuangZhou 5106403, China) Abstract: Isothermal real-time fluorescence technology is one of the most novel nucleic acid amplification method. 6 primers targeting the nuc gene of Staphyloccocus aureus was applied to detect S. aureus with ESEQuant tube scanner; Specificity of the primers was examined using stander strains of S. aureusand non-S. aureusstrains.S. aureus isolated from food was detected by LAMP based assay and by real time PCR. The