基干产品技术要求PCR类检测试剂质量控制.docVIP

基于产品技术要求的PCR类检测试剂的质量控制 　　摘要：结合PCR类检测试剂产品工艺特点、产品技术要求及《体外诊断试剂注册管理办法》等现行法规的要求，分析PCR类检测试剂生产过程中的生产环境、原材料质量要求、工艺用水及产品性能检测等方面的关键控制点，为该类体外诊断试剂在生产质量管理和产品注册方面提供一定的技术参考 关键词：PCR类检测试剂；产品技术要求；质量控制 Abstract：Combining with the characteristics of PCR Detection Reagents， product technology requirement and the current regulations requirements such as measures for the administration of IVD registration， the article analysis the critical control points about environmental requirements、raw materials quality、process water and testing methods in manufacture process of PCR detection reagents，so as to to provide certain technical reference for its product quality management in manufacture process and product registration. Key words：PCR detection reagents；Product technical requirements； Quality control PCR类检测试剂是指运用PCR检测技术，在体外对人体血液等样本中提取的DNA或RNA进行检测分析的产品。目前PCR类检测试剂常基于原位杂交法、荧光定量PCR法、反向点杂交法等技术在体外实现病原体的检测、特定疾病诊断及基因多态性的分析等临床用途。PCR类检测试剂目前按照三类体外诊断试剂管理，自新版《医疗器械质量监督管理条例》于2014年6月1日实施以后，法规对体外诊断试剂注册申报资料提出了更高要求。其中《体外诊断试剂注册管理办法》中提出第三类体外诊断试剂产品技术要求具体内容等的要求。本文则基于体外诊断试剂的产品技术要求，总结与分析PCR类检测试剂生产过程的质量控制 1 生产工艺及操作环境控制 PCR类检测试剂一般由PCR反应液、核酸提取液、酶液等部分组成，常配带阴性、阳性参考物或对照品。基于探针杂交法的试剂还包括固相载体（如尼龙膜、NC膜、微孔板等）。该类试剂的生产工艺因结合技术不同而有差异性，但大致可以总结为：配液、分装、中间品检测、成品包装及成品检测，探针杂交法前期会涉及探针的构建、质粒抽提、纯化等，每一工艺环节应按照经验证符合要求的参数进行控制，需与已经核定的产品技术要求中附录的工艺研究保持一致。如配液需注意PH值、浓度、澄明度、无固体不溶物等，分装则对装量差、均一性等进行控制 基于新法规《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》的要求，该类试剂的配制、分装应在十万级洁净车间内完成。而阴、阳性对照品等涉及血源性或质粒的抽提、纯化、稀释、配制及分装过程应当在至少万级洁净环境下进行，与相邻区域保持相对负压，并符合防护规定。为避免扩增过程产生的气溶胶造成交叉污染，生产与检验区应在各自独立的建筑中或空间中进行。另外，结合产品本身质量要求应当对环境进行特殊控制，如涉及荧光杂交法中探针上的荧光基团见强光容易发生淬火，故在涉及探针杂交、杂交后洗涤等处理过程需在避光环境下操作 试剂反应体系的易污染性决定了实验室检测区域应严格划分和合理分布走向。进入各个工作区域的人员及物品必须严格遵循单一从上游操作区到下游区的原则，即只能从样本处理区、目的基因提取区、扩增区至产物分析区，但若采用的检测设备能实现扩增分析自动化全过程，可以根据实际情况合并最后两区域。PCR类检测试剂的实验区具体可参照《临床扩增分析实验室设置》的要求进行设置。操作人员需严格按照规定佩带手套及穿工作服，避免裸手操作造成核酸污染。移液抢等配制器具应定期用10%次氯酸钠消毒或经高压灭菌处理，操作台应开启紫外线照射消毒等 2原材料控制 《体外诊断试剂注册管理办法》中提出第三类体外诊断试剂产品技术要求中应当以附录形式明确主要原材料。因此，企业在PCR类检测试剂研发试制过程就应明确原材料的来源、质量级别、安全性特性及检测方法等信息，并按实际原材料及反应体系的研究情况输出技术要求。原材料的控制分两