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微生物突变体的获得方法 Home label 来源：生物技术通报 2010年第2期 构建微生物突变体的方法综述 张念章 逯忠新 突 变 体 什么是突变体？ 定义1： 一般指带有已经发生突变的基因的细胞、病毒或细菌，有时也指发生突变的基因。 定义2： 携带突变基因的细胞或个体。 (mutant) Home label 化 学 方 法 Home label back 物 理 方 法 1.紫外 2.电离辐射 3.离子注入 4.微波 5.其它 Home label back 紫 外 紫外线是诱发微生物突变的一种非常有用的工具。DNA和RNA的嘌呤和嘧啶有很强的紫外吸收能力，最大的吸收峰在260 nm 。 因此，波长在200-300 nm的紫外光才有诱变作用。紫外线可引起生物体形成嘧啶(主要是胸腺嘧啶)二聚体、嘧啶水 合物和引起DNA分子交联。 其中形成嘧啶二聚体的生物学效应研究的比较清楚。由于二聚体的出现会减弱双链间氢键的作用，引起双链结构扭曲变形。 同时又会妨碍双链的解开，阻碍碱基正常的互补配对，影响DNA的复制和转录，从而导致突变或死亡。 尽管不断有新型的诱变技术产生，紫外诱变技术因其操作简单，效果显著，在很多领域仍然发挥重要作用。 Home label back 电离辐射是指一切能引起物质产生电离作用的辐射总称。生物学上常用γ射线进行辐射，此外还有Χ射线、β射线和快中子等。这些射线可直接将能量传递给生物分子，使细胞中有序排列的生物大分子处于激发和电离状态。引起遗传物质的变化主要是碱基的氧化作用，糖苷键及DNA单链键或双链键断裂。伴随着生物大分子化学键的断裂，有机体内产生大量的离子和自由基。这些自由基与细胞中的溶质分子相互作用，诱发酶的释放，导致代谢的方向性和协调性紊乱，促使开始的生物化学损伤进一步发展，引起了机体内环境的进一步变化。 电离辐射 Home label back 离子注入技术最早用于农作物育种，近几年来因其在微生物诱变育种中的高效性，得到了越来越广泛的应用。离子注入生物体内会在动量、能量和 质量的三重作用下产生不同的生物学效应。因此，与生物体的相互作用存在峰值，在峰值范围内，注入离子与生物体的相互作用是局部的、双重的和不易修复的。 在离子注入过程中，生物分子将会吸收能量，经历复杂的物理和化学的变化，产生各类自由基。这些活性自由基，不但可以引起正常生物分子的损伤，致使细胞中的染色体畸变，DNA链断裂，也可使质粒DNA形成断裂点。产生染色体重复、易位、倒位，碱基缺失等多种生物学效应。离子注入技术与目前其它的诱变源相比，具有LET值高，射程可控，集束性好，能量沉积和质量沉积区域集中等优点，在不同的作物及菌种的诱变育种中发挥出巨大的作用. 离子注入技术 Home label back 微波辐射属于一种非电离性高频电磁波，在300 MHz一300 GHz范围内有较强的生物效应，主要对生物体产生热效应和非热效应。在微波作用下，生物体会产生局部温度上升(热效应)以及非温度关联的各生理生化反应(非热效应)，进而产生一系列突变效应。 除上述的方法之外，还有利用其它物理因素进行的诱变，如利用激光、太空条件等，或多种方法联合使用构建生物突变体。 微波辐射 Home label back 化学 诱变 方式 1.烷化剂 2.其它诱变剂及复合诱变 Home label 0.化学诱变 back 化学诱变剂是一类能和DNA起作用，进而改变DNA的空间结构或者结构组成，导致DNA产生变异的物质。按其诱变机制可分为碱基类似物诱变剂、直接诱变DNA结构的诱变剂和诱发移码突变的诱变剂3类。利用化学诱变剂进行的化学诱变具有使用方便，特异性较强和诱变后代较易稳定遗传等特点。 该方法已培育出许多具有生产 利用价值的微生物新品种，给生产带来了巨大的经济效益和社会效益. Home label back 烷化剂又称生物烷化剂，是一类能形成碳正离子或其它亲电性基团的化合物。常用的烷化剂包括亚硝基胍(NTG)、甲基磺酸乙酯(EMS)、硫酸二乙醋(DMS)和硫酸二乙酯(DES)。其中Ems是目前公认的效果最好和应用最广的一种化学诱变剂。其诱变作用主要发生在鸟嘌呤N·7位置上，烷基取代H离子后，使之成为一个带正电的季铵基团，从而发生两种遗传