iTRAQ简介8.pptVIP

* iTRAQ简介 iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记同重元素。在质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。 在串联质谱中，信号离子表现为不同质荷比(114～121)的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。 iTRAQ试剂标记原理 iTRAQ技术优势 1：灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白； 2：分离能力强,分析范围广,iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白。 3: 高通量：同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析； 4：结果可靠：定性与定量分析结果更加可靠； 5：自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。 标记 1. 不同的蛋白质样品S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7和S8,首先分别进行蛋白酶水解（通常为胰蛋白酶Trypsin）. 2. 采用不同的标记对酶解片段进行标记后混合。 3. 使用液体色谱和质谱的联用进行一级质谱。 4. 8个不同来源的，同一蛋白的同一个标记肽段在一级质谱上表现为一个峰。 5. 对加入标记的肽段进行二级质谱，这时，平衡基团从报告基团上脱落。 6. 二级质谱后，报告基团在二级质谱低质量区域产生8个报告离子信号：113、114、115、116、117、118、119和121，其强度分别代表8个标记的样品的同一个肽段。 7. 报告离子的峰面积比值就是同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值。 所得到的一级质谱图（MS） 对一级质谱图的每个峰进行二级质谱图（MS/MS） * 基因组学(genomics) 转录组学(transcriptomics) 蛋白质组学(proteomics) 代谢组学(metabolomics) 系统生物学 展望 *