HPLC法测定延续接骨丸中芍药苷含量.docVIP

HPLC法测定延续接骨丸中芍药苷的含量 　　[摘要] 目的 应用HPLC法测定延续接骨丸中芍药苷的含量。 方法 采用高效液相色谱法测定延续接骨丸中芍药苷的含量。采用色谱柱：Agilent TC-C18（2）5 μm，250×4.6 mm，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），流速为1.0 mL/min，检测波长230 nm，进样量为5 μL。 结果 芍药苷在0.02514～1.0056 μg范围内，进样量与峰面积线性关系良好（r=0.9997）；平均加样回收率97.43%（RSD=0.79%）。 结论 应用HPLC法测定延续接骨丸中芍药苷的含量操作简便、结果准确、重现性好 [关键词] 延续接骨丸；牛黄；赤芍；芍药苷；HPLC [中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2016）27-0115-03 延续接骨丸为我市中医院生产的医院制剂，由当归、红花、川芎、延胡索、赤芍、乳香等15味中药材经干燥，粉碎，过筛，混合，每100 g粉末加炼蜜80 g制成大蜜丸，具有活血散瘀，消肿止痛的作用，主要用于治疗跌打损伤，青紫肿痛，闪腰岔气，筋断骨折，瘀血作痛。由于原来的医院制剂标准中没有含量测定项，本文参照《中国药典》2015年版一部、四部，并查阅相关文献[1-6]，采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）定量检测处方中赤芍的芍药苷含量，专属性强，精密度和重复性良好。采用该方法可进一步控制生产中赤芍投料，为延续接骨丸质量监管提供有力的参考依据，现报道如下 1 仪器与试剂 1.1 仪器 岛津2010 CH-T型高效液相色谱仪（包括自动进样器、柱温箱、四元低压泵、紫外检测器等重要组成部分）；BP211-D电子天平。LabAlliance HS3120 超声清洗器 1.2 试剂 乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸为分析纯，芍药苷对照品（批号110736-201640，含量为95.2%）由中国食品药品检定研究院提供。延续接骨丸样品由辽阳市中医药制剂室提供，批号分别为160324、160420、160526 2 方法与结果 2.1色谱操作条件及系统适用性 采用色谱柱：Agilent TC-C18（2） 5 μm，250×4.6 mm，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），流速1.0 mL/min，波长230 nm，进样量 5 μL，柱温30℃； 2.2 溶液的制备 （1）样品溶液配制：取样品适量，剪碎，混匀，取样品约3 g，精密称量置于锥形瓶中，加入稀乙醇溶液50 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，冷却至室温，再称定重量，将上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液（图1）。（2）对照品溶液配制：取芍药苷对照品约20 mg精密称定，至100 mL容量瓶中，加稀乙醇适量溶解，取5 mL上述溶液至20 mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度即得（图2）。（3）阴性样品溶液的制备 按工艺方法制备缺少赤芍的阴性样品，并根据“（1）”方法制备（图3） 2.3 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品25.14 mg置于50 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液0.1、0.2、0.5、1、2、4 mL，分别置于10 mL量瓶中，加稀乙醇或甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件进样，记录色谱图，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归分析。回归方程为：Y=12063.5X-19118，r=0.9997（n=6），表明芍药苷在0.02514～1.0056 μg范围内，线性关系良好 2.4 精密度试验 取50.28 μg/mL芍药苷对照品溶液，进样量为5 μL，连续测定5次，以峰面积计算，RSD为0.8%，说明仪器精密度良好[5，7-10] 2.5重复性试验 见表1 2.6稳定性试验 取样品测定项下的供试品溶液在常温条件下放置0、2、4、6 h后分别进样测试，记录色谱图，按峰面积计算，RSD为0.81%，结果表明供试品在常温条件下6 h内稳定性良好。见表2 2.7 加样回收率试验 取已知含量（0.854 mg/g）的样品6份，精密称定，然后分别精密加入0.2618 mg/mL的对照品溶液5、10、15 mL，再分别精密加入稀乙醇45、40、35 mL，称定重量，超声处理（功率200 W，频率40 KHz）30 min，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。照样品测定项下方法测定，见表3 2.8耐用性试验 分别采用3根不同商品规格的色