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(2). Derivation of Human Pluripotent Stem Cells Establishment and derivation of human embryonic stem cell line 供者的选择 1 直系亲属供者（familial grafting）：减少HLA配伍的差异； 2 组织配型（tissue typing）：用血清学和分子生物学方法对供者和受者进行HLA 组织型进行鉴定，以确保他们HLA相似或者相同。同种肾脏移植时，HLA-DR配型最为重要，HLA-B、A次之。 防止移植排斥反应的途径 同胞兄妹：四分之一 非血缘：四百万分之一~万分之一 3 交叉细胞毒试验 ：受者的血清与供者白细胞混合后做间接免疫荧光试验以排除受者体内有事先产生的抗供者抗体的可能性； 受者的血清 供者白细胞 荧光标记的兔（羊）抗人抗血清 间接免疫荧光试验 荧光显微镜下观察 4 天 3H-胸腺嘧啶 混合淋巴细胞 4小时 计量放射性 混合淋巴细胞培养 ? ? g-射线 混 合 淋 巴 细 胞 反 应 PBL PBL 4 交叉配型（cross-matching） 移植物和受者预处理 1 去处移植物中的过路细胞； 2 血浆置换术去除针对血型抗原的抗体、受者脾脏切除、免疫抑制 免疫抑制药物的应用 1 糖皮质激素、环孢素A（cyclosporin A，CsA）、环磷酰胺（cyclophosphamide，CP）、FK506和细胞毒性药物等免疫抑制药。 2 生物制剂：ALG、ATG、抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗TCR等。 三、异种移植 HAR是异种移植的首要障碍，是人体内一些天然抗体（natural antibody）所介导的。 这些天然抗体识别猪组织细胞表面的异种抗原（xenoantigen），尤其是表达于血管内皮细胞表面的半乳糖成分 a-1,3-半乳糖苷 (Gala-1,3Gal)。 天然抗体与血管内皮细胞结合后激活补体，手术后几分钟至数小时之内就可导致移植器官血管栓塞、坏死。 异种移植过程中的超急排斥反应（HAR） Natural antibodies bind specifically vascular endothelial cells, which activates the complement, resulting in an intense infiltration of neutrophils into the graft tissue. The ensuing inflammatory reaction causes massive blood clots within the capillaries, and graft necrosis. 3. Neutrophil lytic enzymes destroy endothelial cells; platelets adhere to injured tissue, causing vascular blockage. platelets 手术后几分钟至数小时之内就可导致移植器官血管栓塞、坏死。 天然抗体 [人] 激活补体[人] 半乳糖成分 a-1,3-半乳糖苷 (Gala-1,3Gal) [猪] 血管内皮细胞 抑制 HAR 的可能途径 用含有蔗糖转移酶的缓冲液术前对器官进行灌流，对Gala-1,3Gal加以修饰使其在结构上与人的糖基十分类似，不再被人天然抗体所识别； 在术前用带有 Gala-1,3Gal 糖基的微球柱吸附清除宿主血清中的天然抗体; *抑制补体在被移植组织细胞表面的活化； *将猪的a-1,3半乳糖苷转移酶基因敲除； NH2 CL CL CL CL NH2 CL CL CL CL 补 体 抑 制 因 子 CD55 CD46 胞浆区 胞膜 GPI锚固 CD46和 CD55 CD55（DAF：Decay Accelerating Factor， 补体衰变加速因子）是经GPI锚固于胞膜表面的75 kDa 糖蛋白，能够与C3b结合并且降解C3/C5转化酶。 CD46是一个分子量为56-66 kDa的共二聚体膜蛋白，与CD55、CR1和CR2等具有同源性。能够与C3b和C4b结合并使之被I因子降解。 Regulation of Complement Activation (Terminal pathway) C5b-8 C9 CD59 Inhibition of C9 binding 由于补体调节机制具有同源限制性（homologous restriction），猪组织细胞表面