科立得（固定底物技术酶底物法）检测试剂.PDF

™ ™ 科立得 （固定底物技术酶底物法 ）检测试剂 介绍 科立得™可以同时检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或者耐热（粪）大肠菌群，是GB/T5750.12-2006 国家标准检验方法，其原理是根据爱德士(IDEXX)的专利技术—固定底物技术酶底物法（Defined Substrate Technology DST ™ ）。如果水样中存在总大肠或者耐热（粪）大肠菌群，则它的特异性代谢产物与试剂 （MMO-MUG培养基）的主要成分ONPG反应，使溶液显黄色；如水样中有大肠埃希氏菌，则它的特异性 代谢产物与MMO-MUG培养基中的MUG反应使溶液显荧光。科立得™可以在24小时内同时检测出总大肠菌 群和大肠埃希氏菌或者耐热（粪）大肠菌群，并可以抑制100ml水样中的2百万个杂菌干扰，最低检出限 为1cfu （总大肠菌群和大肠埃希氏菌或者耐热（粪）大肠菌群）/100ml水样。 包装 WCHN200: 每包装200个检测试剂，用于检测100mL水样。 储存条件 2-30°C避光储存 定性检测 1. 将一个包装试剂倒入装有100ml水样的无菌取样瓶中 2. 盖上盖子，摇匀。 3. 放在36±1℃培养24小时；或者放在44.5±0.2℃，培养24小时 4. 根据下表的说明判断定性检测结果。 定量检测（用于检测100mL水样） 1. 将一个试剂倒入装有100ml水样的无菌取样瓶中 2. 盖上盖子，摇匀。 3. 将水样全部倒入51孔或97孔定量盘™中，使用专用的程控定量封口机封口。 4. 放在36±1℃培养24小时；或者放在44.5±0.2℃，培养24小时 5. 根据下表的说明读取定量检测结果，数出阳性格子数后对照MPN表得到定量检测结果 检测结果说明 现象 结果 36±1℃或44.5±0.2℃温度下培养24小时，颜色 总大肠菌群，大肠埃希氏菌阴性耐热(粪)大 1 比阳性对照物 的黄色浅 肠菌群阴性 * 36±1℃培养24小时，颜色与阳性对照物 的黄色 总大肠菌群为阳性 相同或颜色更深 * 44.5±0.2℃培养24小时，颜色与阳性对照物 的 耐热(粪)大肠菌群阳性 黄色相同或颜色更深 * 36±1℃培养24小时，颜色与阳性对照物 的黄色 大肠埃希氏菌为阳性 相同或颜色更深，且在紫外灯下显荧光 • 在暗室中，使用6瓦，366nm的紫外灯在距样品15厘米左右的位置观测是否显荧光。 • 结果应在24-28小时内读取。此外，总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热（粪) 大肠菌群培养时间小于24 小时已经为阳性；或总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热（粪) 大肠菌群大于28小时依然为阴性，则结 果也有效。 实验注意点 ™ 2 • 科立得 试剂可以使用多管法进行检测。检测结果可参阅《水与废水检验标准测试方法》 中的MPN表 • 如果水样品有背景颜色，请做一个空白试验，与科立得™检测结果相比较。 • 如果水样品被稀释，则在读取MPN表时乘以相应的稀释倍数。 • 只可使用灭菌水，不含缓冲液的水，不含氧化剂的水进行样品稀释。 • 科立得™用于常规水样检测，不可以用于浓缩水样。 • 如果样品中含有过多的氯，则加入科立得™可能显蓝光，则该水样不可用。 • 科立得™无需在无菌室中进行,但操作过程应避免微生物污染。 质量控制 1. 下列任意一种质量控制步骤都适用于科立得™试剂检测总大肠菌群和大肠埃希氏菌的质控： 3 A.