斐林试剂与班氏试剂.docVIP

斐林试剂与班氏试剂 高中生物教材（实验修订本）的有关实验中用到了斐林试剂和班氏试剂，二者都可用于鉴定可溶性还原糖，但两种试剂的配制、反应原理及使用方法均有所不同，教材只介绍了斐林试剂的配制和使用方法，对班氏试剂的配制和反应原理没做任何解释。班氏试剂是如何配制的？与斐林试剂的配制、反应原理有何不同？学生对此有较多疑问，现解释如下。 1.斐林试剂的配制、使用方法及反应原理 斐林试剂由甲液（0.1g/mlNaOH）和乙液（0.05g/mlCuSO4）组成，用于鉴定可溶性还原糖，使用时将等量的甲、乙液混合均匀，取适量加入待测液，此时溶液呈蓝色。沸水浴加热2min左右，即可观察到有砖红色沉淀生成，说明待测液中有可溶性还原糖。 甲、乙液混合时，生成了Cu(OH)2，而新制的Cu(OH)2在还原性糖的作用下，被还原为CuO砖红色沉淀。实验过程中，必须先把甲、乙液等量混合均匀，使Cu(OH)2充分生成。如果先后或者分别把NaOH和CuSO4溶液加入到含有还原性糖的组织提取液中，其中的有机酸会与NaOH迅速反应，使反应物中没有Cu(OH)2或者Cu(OH)2量不足，从而使还原性糖与Cu(OH)2的反应不能进行或现象不明显，影响还原性糖的鉴定。 2.班氏试剂的配制、使用方法及反应原理 班氏试剂一般用于尿糖的测定，有时也用于其他实验中可溶性还原糖的鉴定。配制方法：取柠檬酸钠86.5g和无水碳酸钠50g放入1000ml锥形瓶中，加水350ml，加热至溶解。另取100ml锥形瓶加入硫酸铜8.65g，加水约50ml，加热溶解。待二者冷却至室温，将硫酸铜溶液慢慢倒入前液，随时搅匀，并补足水量至500ml。 使用时，取1ml班氏试剂加入试管，加入糖尿病患者的尿液0.1ml，混匀后沸水浴加热，可观察到溶液开始为蓝色，后来出现黄绿色、土黄色或砖红色沉淀，分别反映出患者尿液中糖含量的多少，结果见下表。 沸水浴加热后的现象 葡萄糖含量（g/dL） 透明蓝色 无 加热时无变化，仅冷却后有少量沉淀 微量，约0.5以下 加热1min后即出现少量黄绿色沉淀 少量，约0.5～1 加热约10～15s即再现土黄色沉淀 中量，约1～2 加热时很快出现多量砖红色沉淀 大量，约2以上 班氏试剂在配制过程中，当把硫酸铜溶液倒入由柠檬酸钠和无水硫酸钠配制的溶液中时，硫酸铜与硫酸钠和柠檬酸钠相遇，能产生出一种可溶性的又能离解出Cu2+的可溶性络盐，即柠檬酸钠此时能防止氢氧化铜沉淀的形成，做了一种亲水性掩蔽络合物形成剂。 当利用班氏试剂测定还原性糖时，还原性糖在这种碱性溶液中能将Cu2+还原为Cu+，Cu+再与OH－合成黄色的CuOH，加热后，CuOH即变成砖红色的氧化亚铜（CuO）沉淀。 综上所述，斐林试剂与班氏试剂在配制和使用上均有所不同，不能混为一谈。另外，斐林试剂不稳定，必须现配现用，而班氏试剂配制好以后可较长时间保存。