《转基因物安全》复习资料.docVIP

《转基因生物安全》 绪论 1) 转基因生物(GMO)： 采用基因工程手段将从不同生物中分离或人工合成的外源基因在体外进行酶切和连接，构成重组DNA分子，然后导入受体细胞，使新的基因在受体细胞内整合、表达，并能通过无性或有性增殖过程，将外源基因遗传给后代，由此获得的基因改良生物称为转基因生物。 2) 转基因生物及其分类：转基因动物(GMA) 转基因植物(GMP) 转基因微生物(GMM) 转基因作物(GMC) 转基因食品(GMF) 3) 转基因植物的发展： 自1983年第一株转基因烟草获得以来，至今已有120多种植物转基因获得成功。 世界上第一例商品化生产的转基因植物是延熟保鲜的转基因番茄（1994年） 第1,2章 转基因技术原理：转基因技术的主要过程；基因工程载体的种类及良好的载体所具备的功能；动植物转化的受体系统；转基因方法（农杆菌介导转化法、基因枪法、体细胞核移植法等）；目的基因与报告基因，转化体在DNA/RNA/蛋白质三个水平的鉴定方法。 1）转基因技术主要过程 1、目的基因的获取 2、含有目的基因重组质粒的构建 3、受体材料的选择和转化系统的建立 4、转基因方法的确定和外源基因的转化 5、转化体的筛选和鉴定 6、转基因生物的育种利用 转基因的重组子构建技术 -------构 重组分子导入宿主休内的转化技术 -------转 转基因在受体细胞染色体上的稳定整合 -------整 转基因的可控性表达技术 -------表 载体(vector)： 在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。 基因工程载体必须具备以下几个功能 ①容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。 ②能在宿主细胞中稳定地复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。 ③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。 ④容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作 ⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。 为外源基因提供进入受体细胞的转移能力 为外源基因提供在受体细胞内复制或整合的能力 为外源基因提供在受体细胞内的扩增和表达能力 载体种类 克隆载体（cloning vector）： 主要是对目的基因克隆，建立DNA文库和cDNA文库，其上有复制子即可； 表达载体（expression vector）： 能使目的基因在宿主细胞中表达的一类载体。这类载体既有复制子，更要有强启动子； 穿梭载体（shuttle vector）： 这类载体可以在原核细胞中复制，也可在真核细胞中扩增和表达。 三种最常用的载体：质粒 噬菌体 动植物病毒 植物基因转化受体系统：是指用于基因转化的外植体，通过组织培养途径或其他非组织培养途径,能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源DNA整合，转化选择对抗生素敏感的再生系统。 （受体是指用于接受外源DNA的转化材料） 不同的受体系统适应不同转化方法的要求和不同的转化目的，具体操作时应根据植物种类、基因载体系统及实验设备等因素选择应用。 受体材料的选择 良好的植物基因转化受体系统应满足如下条件： 1、高效稳定的再生能力； 2、受体材料要有较高的遗传稳定性； 3、外植体来源方便，如胚和其它器官等； 4、对筛选剂（选择性抗生素）敏感； 5、转化率高 常规的植物基因转化受体系统 1 2 3 4 一、原生质体受体系统 原生质体:去除细胞壁后的“裸露”细胞,具有全能性，恢复细胞壁具有分化再生能力，能在适宜的条件下诱导出再生植株，是应用最早的再生受体系统之一。 可以利用物理或化学的方法改变细胞膜的通透性，使外源DNA进入到细胞内并进行整合表达，从而实现植物基因转化。已有烟草、水稻、小麦和玉米等250多种植物原生质体培养获得成功。 优点：1、DNA易导入细胞，高效、广泛地摄取外源DNA或遗传物质; 2、获得基因型一致的克隆细胞，由原生质体再生所获转基因植株嵌合体少; 3、可适用于多种转化方法，如电击法、PEG法、脂质体介导法和显微注射法等； 缺点：培养技术难度大，培养周期长，不易制备；再生困难；培养所形成的无性细胞系变异程度高，遗传稳定性差。 二、愈伤组织受体系统 愈伤组织：无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，在伤口表面形成新的组织。这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件