歪带石斑鱼免疫球蛋白D和T重链基因的克隆与表达剖析.docVIP

斜带石斑鱼免疫球蛋白D和T重链基因的克隆与表达分析 石斑鱼（Epinephelus coicoides）是我国沿海地区珍贵的海水养殖鱼类，但是近年来各种疾病不时发生，养殖者损失惨重，严重制约了我国石斑鱼养殖业的健康发展。免疫球蛋白是鱼类免疫系统的重要组成部分，对石斑鱼IgD和IgT的研究不仅在低等脊椎动物发育与比较免疫学方面具有重要理论意义，而且在鱼类病害防治方面具有重要的应用价值。本研究克隆了斜带石斑鱼IgD和IgT的重链cDNA并进行遗传分析，此外在基因转录水平上研究了它们在各组织器官中的表达变化。 为获得斜带石斑鱼分泌型IgD和IgT重链全长cDNA，通过参照已有的同源序列设计简并引物，应用PCR和RACE-PCR技术，扩增到IgD和IgT重链cDNA。 IgD cDNA全长为3375 nt，5′和3′非编码区分别含有30 nt和336 nt，开放阅读框包含3006 nt，编码1002个氨基酸，在3′ UTR出现多个多聚腺苷酸加尾信号（AATAAA）和两个mRNA不稳定信号(ATTTA)，序列包含poly(A)，其基因结构为VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。与其它鱼类IgD恒定区氨基酸序列比较，结果显示，半胱氨酸和色氨酸残基都比较保守。IgT cDNA全长为1949 nt，5′和3′非编码区分别含有82 nt和229 nt，开放阅读框为1635 nt，编码545个氨基酸，在3′ UTR出现1个多聚腺苷酸加尾信号和一个mRNA不稳定信号，序列包含poly(A)。与斑马鱼、鳜鱼和虹鳟恒定区氨基酸序列比较，斜带石斑鱼IgT的恒定区划分为典型的CH1、CH2、CH3和CH4四个部分，半胱氨酸和色氨酸保守位点在IgT中同样存在。软件预测表明两种免疫球蛋白分子均为水溶性蛋白。 应用生物软件DNASTAR对斜带石斑鱼及相关鱼类IgD和IgT重链氨基酸全长序列进行同源性分析，结果显示斜带石斑鱼IgD同鳜IgD相似性最高，达到71.3%，其次分别为牙鲆（61.8%），庸鲽（64.2%），红鳍东方鲀（58.7%）、大西洋鲑（53.0%）、虹鳟（44.0%）、斑点叉尾鮰（37.9%）和大西洋鳕（34.1%），而同斑马鱼相似性最低，仅为28.4%。斜带石斑鱼IgT与鳜、虹鳟和斑马鱼IgT/Z的相似性分别是68.2%、44.5%和27.0%。使用Mega3.1邻接法（Neighbor Joining）构建免疫球蛋白的系统进化树，结果表明IgM、IgT/Z和IgD分别各聚为一枝。斜带石斑鱼IgD与鳜、牙鲆和庸鲽IgD聚为一枝，进化关系最近；IgT与鳜和虹鳟IgT聚为一枝，与斑马鱼IgZ聚为一大枝，较好地显示了免疫球蛋白分子的进化关系。 以β-actin为参照基因，利用RT-PCR对正常斜带石斑鱼头肾、肾脏、脾脏、心脏、肝脏、皮肤、肠、胸腺、脑、鳃等组织中的IgD和IgT重链基因在转录水平进行了分析。发现IgD主要在头肾、中肾、脾脏和胸腺中表达，鳃和肠中也有少量IgD表达，而在心脏、皮肤、肝和脑中几乎没有表达。不同于IgD的表达，IgT则主要在头肾、中肾和脾脏中表达，鳃、胸腺和心脏中也有少量表达。LPS或PolyI:C刺激后，在除脑外所有的被检组织中均能检测到IgD和IgT重链基因转录本有表达，其中在头肾、脾脏、肾脏和胸腺中均有明显的上调表达。值得一提的是，LPS或PolyI:C诱导后的鳃、肠和皮肤中的IgT上调表达变化较大，暗示免疫球蛋白分子IgT在鱼类的黏膜免疫中发挥重要的作用。 关键词：斜带石斑鱼；免疫球蛋白；重链；IgD；IgT；基因克隆；表达 相关帮助 本文由探生网技术人员提供，如果您想了解更多的信息，可以访问全球抗体搜索引擎查找相关抗体，希望对您有帮助！ 抗体应用，找抗体，抗体定制，抗体搜索，抗体制备，抗体公司 相关实验试剂和器材：