人外周血淋巴细胞分离方法教案.pdfVIP

人外周血淋巴细胞分离方法 1. 实验前准备 2. 使用方法说明及图例 2.1 血液样本分离液使用说明及图例 2.2 组织分离液使用说明及图例 3. HES-TBD550使用说明 4. 组织单细胞悬液的制备 5. 注意事项 6. 性能指标 7. 生产企业 8. 参考文献 5. 注意事项 A ． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃- 25 ℃避光保存，启封后置4 ℃保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于 10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。 B ． 待分离的血液、组织及细胞要求新鲜，避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20 ℃ 水浴箱中复温20分钟保证分离液和所分离样本温度在20 ℃±2 ℃时分离效果最好，且所有操 作过程一定要在无菌条件下进行。 C ． 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果 ，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验 室自定）。 D ．最好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。 E ． 最优抗凝剂选择：EDTA 、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。 F ． 分离过程中所用其他试剂如：羟乙基淀粉550、全血及组织稀释液、细胞洗涤液及红细胞裂 解液等以我公司产品为最优选择，本公司相关系列产品无菌、无病毒、无支原体、低内毒 素水平且无细胞毒性，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。 6. 产品性能指标 pH 　 7.0-7.5 渗透压　 280-340mOsmol/kg 内毒素 ≤0.5EU/ml 无菌 直接接种培养14天后培养基澄清 澄明度及不溶性颗粒物 每50ml溶液中含10μm以上的不溶性微粒20粒以下，含2 5μm以上的不溶性微粒5粒以下 贮藏及保存期限 18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。 注：若保证无微生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易 出现白色结晶，影响分离效果。 1. 实验前准备 A ． 试剂 淋巴细胞分离液、全血及组织稀释液、细胞洗涤液、羟乙基淀粉550、胎牛血清 B ． 器材 玻璃离心管、玻璃滴管 水平转子离心机、无菌工作台 2. 使用方法说明及图例 2.1 血液样本分离液使用说明及图例 A. 小量分离-使用1-2ml新鲜抗凝血（分离图例见图例1）： a. 取新鲜抗凝血1-2ml，与全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）1:1 混匀； b. 小心加于与混合液等体积的细胞分离液（货号：LTS1077）之液面上； c. 以400g（约1500转/分）离心15分钟(半径15cm水平转子)； 此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层；为血浆层。第二层；为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含4- 5ml细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心 20分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。 B. 中量分离-使用5-10ml新鲜抗凝血（分离图例见图例1）： a. 取新鲜抗凝血5-10ml，与全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）1:1 混匀； b. 将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上 （混合液：分离液=2：1）； c. 以500g（约1800转/分）离心15分钟(半径15cm水平转子)； 此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层；为血浆层。第二层；为环状乳白色淋 巴细胞层。第三层；为透明分离液层。第四层；为红细胞层。收集第二层细胞放入含10ml 细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，充分混匀后，以500g（约1800转/分）离心20 分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。 C. 大量分离I-使用20ml新鲜抗凝血（分离图例见图例2）： a.