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荧光探针概述 为什么用荧光探针 荧光原理及影响因素 重要荧光发色团 荧光探针的类别 …… 为什么用荧光探针？ 荧光分析：超敏、快速、多通道、高通量、安全、低成本 荧光成像：微环境、无损、高分辨率、原位在线 荧光原理 吸收（激发） 内部转换 振动弛豫 荧光发射 系间跨越 磷光发射 荧光：分子接受光能激发后，从第一电子激发态最低振动能级返回基态时发射出的光。 吸收（激发）光谱 物质呈现颜色为吸收的补色 荧光光谱 荧光颜色 Stokes位移 半峰宽 吸收强度 A = ε·C·L 荧光强度 FI 正比于ε·φ·I0 I0可以很大，荧光分析灵敏度高的原因 荧光多参量：波长、强度、寿命、偏振… 荧光原理 荧光原理 荧光量子产率φ （Φ测量方法、公式） 荧光强度 FI 正比于ε·φ·I0 ε·φ：内在亮度(intrinsic brightness) （举例） 荧光必要条件：吸收强(ε大)，量子产率高(φ大) 分子结构 （内因） 共轭体系（芳环、稠环） 刚性共平面性 取代基效应（复杂） 荧光影响因素 环境因素（外因） 极性 酸碱度 粘度 温度 …… 重要荧光发色团 重要荧光发色团 趋势：长波长、近红外荧光发色团 Chem. Commun., 2008, 1780. J. Org. Chem., 2012, 77, 669. 荧光探针的主要类别 应用 生物标记试剂 核酸探针 酶活性探针 亚细胞定位探针 金属离子探针 微环境探针 …… 原理 化学反应性 电子转移 能量转移 电荷迁移 …… 材料 荧光染料 荧光蛋白 发光配合物 荧光微球 纳米量子点 ……