基因工程复习2011年14日.docVIP

基因工程genetic engineering 在分子水平上，提取（合成）不同生物的遗传物质，在体外切割，和一定的载体拼接重组，把重组DNA分子引入细胞和生物体内，使外源DNA在受体细胞中复制和表达，按需要繁殖扩增基因或生产不同产物或定向创造生物新性状，并稳定遗传给下代。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，然后将蛋白质从凝胶转移到一种固相支持物上，通过抗体与附着于固相支持物上的靶蛋白所呈现的抗原抗体特异性反应进行检测。 然后两个细菌之间的杂交。部分染色体从一个细胞转入到另一个细胞，是细菌之间交换遗传物质的过程。切割不同的DNA片段但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。利用酵母着丝粒载体所构建的大片段DNA克隆。克隆载体上含有着丝粒、端粒、可选择标志基因、自主复制等序列，可携带插入的大片段DNA(100～1000 kb)在酵母细胞中有效地复制，如同微小的人工染色体。是基因组研究的有用工具。是指一种以F质粒（F-plasmid）为基础建构而成的细菌染色体克隆载体，长用来克隆150kb左右大小的DNA片段，最多可保存300kb个碱基对。cDNA文库有什么特点。如何利用λ噬菌体构建cDNA文库? （15分） 以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同，所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。If you have cloned the herbicide resisting gene and only have binary vectors in your lab, please design an experimental procedure to produce a plant bearing herbicide resisting ability using the leaf-disc transformation method. （15分） [1]通过电穿孔或“大肠杆菌与根瘤农杆菌接合，使除草剂抗性基因中间表达载体转化根瘤农杆菌。并经卡那霉素筛选和PCR鉴定阳性菌株。 [2] 在叶片上打孔得到小叶盘（直径几毫米），并将其表面消毒 [3]?小叶盘与携带重组T-DNA的根瘤农杆菌液体共培养过夜 。 [4]?小叶盘干燥后，转移到固体培养基培养2天。 Or in English 3、PCR技术的原理及技术特点？（15分） 原理：首先是双链DNA分子临近沸点的温度下加热时便会分离成两条单链的DNA分子，（2分）然后DNA聚合酶（1分）以单链DNA为模板（1分）并利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）（1分）合成新生的DNA互补链。此外，DNA聚合酶同样需要有一小段双链DNA来启动“引导”新链的合成。因此，新合成的DNA链的起点，事实上是由加入的反应混合物中的一对寡核苷酸引物（1分）在模板DNA链两端的退火位点决定的。 （或者利用PCR技术对目的片段的快速扩增实际上是一种在模板DNA、（1分）引物（1分）和4种脱氧核糖核苷酸（1分）存在的条件下利用DNA聚合酶（1分）的酶促反应，是通过3个温度依赖性步骤（2分）完成的反复循环。） 特点：(各1分) 1、特异性强 2、敏感性高 3、快速：整个PCR操作过程需3-4小时即可完成。4、简便：扩增产物可直接供作序列分析和分子克隆，摆脱了繁琐的基因分析方法。5、可扩增RNA或cDNA 6、对起始材料质量要求低 7、具有一定程度单核苷酸错误掺入 4、植物/动物转基因有哪些方法？各有什么特点？ 动物转基因有： 磷酸钙转染法DNA／磷酸钙共沉淀 脂质体介导法 ＤＥＡＥ－葡聚糖化学法 电穿孔法 显微注射法 基因枪法 逆转录病毒法 胚胎干细胞法 体细胞核移植法 病毒颗粒转导法 聚阳离子－ＤＭＳＯ转染法 1、显微注射法： 用显微注射法如何获取转基因小鼠？ 准备DNA：纯度高，不带有载体序列 准备小鼠 分离受精卵 显微注射 移植受精卵 鉴定转基因小鼠 建立转基因小鼠品系 2、逆转录病毒法： 3、胚胎干细胞法： 4、体细胞核移植法： 植物转基因有： 植物转基因有： ＤＮＡ直接转移法： 原生质体转化法／