4天美公司LC2000高效液相色谱仪(水行业).ppt

液相历史现状简介 液相色谱整体及概念 液相色谱的基本概念（一） 液相色谱的关键技术 高速反馈、实时控制的流量控制技术 系统采用一个高速CPU对内部压力进行实时监控，在柱塞换向的时间区段内，系统压力有下降趋势时快速反馈给CPU，并发出指令使电机加速运转，消除脉动。反之，当系统压力升高时，则电机减慢运转。 采用这种技术，可实时补偿溶剂压缩率和单向阀换向时的泄漏引起的压力波动。系统中无须任何缓冲装置，也可以稳定输液。 日立传统的HPLC泵就是采用这种设计，而在L-2000系列的泵中，这种实时控制方法在较早的时间段就开始执行，以便进一步降低波动。 紫外检测器的工作原理 色素、防腐剂分析举例标准解读 日常的使用维护事项 液相色谱的流程图（总图） 排放阀清洗 滤头清洗 常见问题的处理 简单的判别方法 高的柱反压是否伴随着 保留时间变化? 峰形变坏? 分辨率变坏? 测量色谱系统的谱带展宽 典型的分析系统应远小于 100 微升 如大于此数应检查仪器系统 * 一、 保留时间变化 1.柱温变化 2.等度与梯度间未能充分平衡 3.缓冲液容量不够 4.柱污染 5.柱内条件变化 6.柱快达到寿命 1.柱恒温 2.至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.用25mmol/L的缓冲液 4.每天冲洗柱 5.稳定进样条件,调节流动相 6.采用保护柱 * 二、 保留时间缩短 1.流速增加 2.样品超载 3.键合相流失 4.流动相组成变化 5.温度增加 1.检查泵,重新设定流速 2.降低样品量 3.流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.防止流动相蒸发或沉淀 5.柱恒温 * 三、 保留时间延长 1.流速下降 2.硅胶柱上活性点变化 3.键合相流失 4.流动相组成变化 5.温度降低 1.管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 2.用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 3.流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.防止流动相蒸发或沉淀 5.柱恒温 * 四?、 出现肩峰或分叉 1.样品体积过大 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 5.进样器损坏 1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 4.更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.更换进样器转子 * 五、 鬼峰 1.进样阀残余峰 2.样品中未知物 3.柱未平衡 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 5.水污染(反相) 1.每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.处理样品 3.重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) 4.每天新配,用抗氧化剂 5.通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 * 六、 基线噪声 1.气泡(尖锐峰) 2.污染(随机噪声) 3.检测器灯连续噪声 4.电干扰(偶然噪声) 5.检测器中有气泡 1.流动相脱气,加柱后背压 2.清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 3.更换氘灯 4.采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 5.流动相脱气,加柱后背压 * 七、 峰拖尾 1.柱超载 2.峰干扰 3.硅羟基作用 4.柱内烧结不锈钢失效 5.柱塌陷或形成短路通道 6.死体积或柱外体积过大 7.柱效下降 1.降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 2.清洁样品,调整流动相 3.加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 4.更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 6.连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 7.用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 * 八、峰展宽 1.进样体积过大 2.在进样阀中造成峰扩展 3.数据系统采样速率太慢 4.检测器时间常数过大 1. 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.进样前后排出气泡以降低扩散 3.设定速率应是每峰大于10点 4.设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% * 八、峰展宽 5.流动相粘度过高 6.检测池体积过大 7.保留时间过长 8.柱外体积过大 9.样品过载 5.增加柱温,采用低粘度流动相 6.用小体积池,卸下热交换器 7.等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 8.将连接管径和连接管长度降至最小 9.进小浓度小体积样品 * * * * * 更换非互溶性的流动相，需准备能与新旧流动相互溶的中介溶剂。 在线脱气 比例电磁阀 检测器 分析柱 混合器 六通进样阀 流动相 排放阀 输液泵 预柱 废液瓶 分析柱 六通阀 检测器 废液瓶 保护柱 流动相 在线脱气 比例电磁阀 输液泵 排放阀 混合器 液相色谱的维护分图—梯度篇 流动相 1、