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应用说明文档28-9966-22 AA 开发开发题 专 用 应 子 分 大
从大肠杆菌获得重组胰岛素原的高通量筛选与工艺
开发
本“应用指南”描述了在大肠杆菌中表达的重组胰岛素原 筛选设定的条件随后可用HiTrap™或HiScreen™预装层
从PreDictor™板筛选到400 mL中试级的完整纯化工艺开 析柱进行验证和优化。带有缓冲液制备和DoE (实验设
发流程。采用PreDictor 96孔预装过滤板、Assist软件和 计)支持功能的AKTA™ avant 25层析系统,简化了在层
装填了1 mL填料的Tricorn™ 5/50层析柱来探索捕获阶段 析柱上的优化,并可通过如HiScale™16/40的层析柱,
的最佳条件。高通量筛选迅速减少了候选层析填料的类 将工艺放大到中试级水平。采用AKTA avant 150系统和
型,并为进一步研究所需的结合及洗脱条件提供了建议。 AxiChrom™层析柱,规模还可进一步的放大。
当捕获阶段条件经过进一步优化和验证后,纯化规模被
B链
扩大400倍。放大平稳且可预测,最终目标产物的回收 A链
率和纯度分别达到96%和82% 。此外,与柱层析法相比 C肽
较,PreDictor板的筛选还节省了相当多的时间和样品。
第二项研究(1)描述了胰岛素原经酶解获得的胰岛素的
中度纯类似工艺流程。
图1.胰岛素原分子简图
引言 本应指南描述了通用电气医疗集团的工艺开发平台,目
的是探索一种捕获重组胰岛素原的稳健方法(图1)。
在工艺开发过程中引入高通量方法能提高效率。减少下 PreDictor板和Assist软件用于确定适用于捕获阶段的层析
游纯化开发步骤所需的时间和样品用量,就可使收益有 填料类型及可能的结合和洗脱条件(2)。根据筛选结果,
所提高。如今,GE Healthcare Life Sciences提供了多种 Capto™ MMC(一种多模式阳离子交换填料)能够直接
产品来提升工艺开发的效率。 与不经稀释的样品结合,被选为最有希望的填料。以筛
PreDictor 96孔板(预装填BioProcess™层析填料)适用 选实验中发现的结合及洗脱条件为起点,在装填了1 mL
于纯化条件和填料的高效、高通量初次筛选。Assist软件 填料的Tricorn 5/50柱上进行了捕获步骤的优化。稳健的
简化了实验设置以及数据管理和评估的过程。 捕获方案一旦建立,工艺可从Tricorn放大到到HiScreen
预装填柱。进一步成功地以Capto MMC装填的HiScale
16/40柱(柱床高度20 cm)再最终放大到到AxiChrom
50/300柱(柱床高度19.5 cm,装填柱的床体积400 ml)。
题 专 用 应 子 分 大 材料和方法 层析柱: Mono Q 5/50 GL (1 mL)
试样: 利用已冲洗注射液注入25 μL的试样
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