双官能萜烯合酶的基因组采集.pptx

LOGO 我们毕业啦 其实是答辩的标题地方 使用双官能萜烯合酶的基因组采集揭示了二萜/萜烯的统一中间体 汇报 制作 翻译 论文摘要 研究背景 研究方法 研究结果与讨论 致 谢 CONTANTS ABSTRACT 4 在后基因组时代，基因组采集是一种发现新型次级代谢物的有前途的方法。 应用米曲霉异源表达系统功能上描述在真菌基因组中发现的隐蔽双功能萜烯合酶基因。 机制之间的差异与 双功能萜烯合酶的系统发育分析一致，表明氨基酸序列反映初始环化模式，其最可能与线性异戊二烯基二磷酸酯的初始构象相关。 研究背景 6 01 PART ONE 02 PART TWO 实际应用 7 03 PART THREE 02 PART TWO 试验方法 9 第一 第二 第三 第四 研究结果 11 在五个真菌基因组中发现的15个双功能萜烯合酶中N-末端萜环化酶结构域的系统发育分析表明这些基因组分离成5个进化枝 从所得四倍转化体提取物的GC-MS分析显示制作的新的代谢物具有分子离子峰对应于sesterterpene醇1（M +，M / Z 358） 双转化体（pUARA2-NfTS2 / AoTS1）也以52.5mg / kg稻米培养基产生1，而单个转化体（pUARA2-AoTS1）不产生。 NOESY谱的详细分析显示3的相对立体化学，除了在C7该分析表明C21甲基和H6位于分子的同一面上 3的绝对立体化学由振动圆二色性（VCD）技术结合密度泛函理论（DFT）计算确定，其揭示了五种低能量构象异构体 结果研究 12 图3.在CDCl 3（c = 0.2M，l = 100mm）中测量并由具有CHCl 3的偏振连续模型（PCM）的B3LYP / TZVP计算的3的振动圆二色性和红外光谱。 生物信息学在TMHMM服务器26上沉积的序列的搜索显示基因产物缺乏N端膜结合区，其对于定位于内质网膜是必需的。我们仔细检查了NFIA_55490的上游区，发现了新的起始密码子154bp上游（图S5）。为了表征NfP450，制备了具有Nf SS和Nf P450基因的双转化体。 LC-MS分析显示转化体以20mg / kg用m / z 387（[M-H] - ）产生2（图4，图S2B）。通过HR-MS分析确定2的分子式C25H40O3。 如在1的情况下，在相应的环氧化物4中可见几个2的丢失信号（表S2），这使得能够确定其结构。 结果表明NfP450催化1至2的氧化修饰，称为sesterfisheric酸。 结果研究 13 图4.由转化体产生的代谢物的HPLC图谱：（A）AO-NfSS / NfP450，（B）AO-NfSS和（C）米曲霉ANSAR1。 THANKS