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淋球菌培养及鉴定 黄景维 2014-10-31 什么是淋球菌？ 共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛 触酶试验（+） 氧化酶试验（+） 不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶 淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。 淋球菌形态 淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵圆形或肾形，成对排列，直径约0．6—0．8~m，常位于多形核白细胞的胞浆内，慢性期则在细胞外。 生长适宜温度为37℃—38℃，淋菌不耐热，干燥环境存活1—2小时，55℃5分钟立即死亡，附着在衣裤和卧具上的淋菌最多只能生存24小时，一般消毒剂易将其杀死。 淋球菌形态 致病性 传染方式：成人 性接触 初生婴儿 患病母亲产道感染 致病物质：菌毛 外膜蛋白PI：中性粒细胞受损 外膜蛋白PII：黏附 外膜蛋白PIII：阻抑抗体活性 IgA1酶:破坏粘膜局部抗体 所致疾病 男性——急性淋菌性前尿道炎 女性——淋菌性宫颈炎、尿道炎 初生婴儿——脓漏眼 发展： 男性——后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、附睾炎等 女性——子宫内膜炎、输卵管炎等 后遗症：不育、不孕、异位妊娠 淋球菌感染 淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系统感染。 不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿道炎，还可经血行播散引起菌血症。 临床表现因感染的人群不同，部位不同而有差别 实验室鉴别淋球菌 直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂片，作革兰染色，镜下可见大量多形核白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴性双球菌。涂片对女性检出率低，有假阴性，必要时应作培养。 细菌培养：标本在选择性培养基上培养，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性，镜检可见到革兰阴性双球菌， 还可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光试验协助确诊。 淋球菌培养 淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的金标准） 淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。 淋球菌培养条件 淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。 国外常用的培养基有Thayer-Martin(T-M)培养基、NewYork City(NYC)培养基和Martin-Lewis(ML)培养基等。 T-M培养基 T-M培养基是在GC基础培养基中，加入血红蛋白(1%)、抗生素(万古霉素3g/ml、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。 淋球菌培养条件 淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。 培养的最适温度为35℃~37℃，超过38.5℃或低于30℃便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。 淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进生长，需用5%二氧化碳环境培养。 淋球菌培养关键 取材部位准确 女性病人标本：取宫颈内膜分泌物 男性病人标本：取尿道口脓性分泌物 培养基预温 立即接种 最好床边接种 合适的培养基 CO2培养 淋球菌鉴定 分泌物 直接涂片染色 分离培养 可疑菌落 涂片染色 生化反应 初步报告 生长特性 平板生长特性 经24h~48h的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化，直径为0.5mm ~1.0mm。 平板生长形态 镜检形态 从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，呈典型革兰阴性双球菌。 镜检形态 镜检形态 来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分离株，一般可诊断为淋球菌，准确率达98%。 对于菌落形态不典型的分离株，来自咽部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分离株，应作确诊试验。 鉴定试验 氧化酶试验 糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖） 30％过氧化氢试验 鉴定依据 形态染色典型：革兰阴性球菌 培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落 生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄糖（麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解） 奈瑟菌属鉴定 菌名 生长 产酸 硝酸盐还 原 DNA 酶 巧