第五章SeparatingTargetGene绪论.ppt

2.序列克隆法 根据目的基因的核苷酸序列分离目的基因。 ■根据已知基因序列或同源基因序列分离目的基因 其基本原理是：先从DNA序列数据库（如GenBank）中查找目的基因的部分序列或其同源基因的序列，再用目的基因或其同源基因的部分序列合成核酸探针。用核酸探针与基因组文库或cDNA文库进行杂交，从而获取含目的基因的克隆子。 ■表达序列标签法分离目的基因 适用于从cDNA文库中一次性大量分离各种已知及未知基因。 其基本步骤如下： a：从组织特异性或细胞特异性的cDNA文库中随机挑选克隆，进行5’端和3’端部分序列（约400bp）的测定。 b：通过对DNA序列数据库（如GenBank）进行联机检索，可以检测出许多已知基因和许多未知基因。 c：通过对基因文库的筛选或基因定位的方法分离目的基因。 ■基因表达系列分析法 此方法可以用来分离在不同发育阶段和生理状态下差别表达的基因。其优点在于可以一次性对大量基因的转录产物进行定量分析，从中找出新的基因。 3.差别杂交及减法杂交技术 ■差别杂交法 差别杂交法适用于分离在特定组织中或特定发育阶段表达的基因以及受生长因子调节的基因，也可有效地来分离经特殊处理诱导表达的基因。 原理： a：制备两种不同的细胞群体，在一个细胞群中目的基因能够表达，而在另一个细胞群体中目的基因不能够表达。 b：分别制备两种不同细胞群体的mRNA，其中一个群