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Example of Aperture Stop evil stray ray (prolongs graduation) aperture stop (pinhole) Aperture Stops The aperture stop (AS) determines the amount of light reaching the image Note the AS increases the f/# AS needed to “clean up” optical signals such as: in front of a detector, such as in  confocal microscopy in front of an objective to reduce stray light Focusing Light in the Real World (1) Things to consider when focusing: #1 Light can not be focused through an aperture smaller than a diffraction-limited spot for a standard lens @ 630 nm, this is ~ 3 ?m diffraction thru circular aperture Focusing Light in the Real World (2) Things to consider when focusing: #2 Lens imperfections will only increase the spot size These imperfections are known as “aberrations” Nowadays, computers generate lens combinations and surfaces to minimize these defects. Aberrations Spherical Aberration Coma Aberration Astigmatism, Curvature of Field Distortion Chromatic Aberration n varies with wavelength, causing color-sensitive image changes may be corrected using achromatic doublets (cancels abbs) 第一章 光学显微镜 第1节 引言 19世纪中前，光学设计水平低 像差大 分辨率差 19世纪中期，Lister(利斯特)和Amici(阿米西)消色差物镜出现 物镜的NA提高到0.65和1.25 显微镜分辨率= 1886年，Abbe(阿贝 )设计高级消色差物镜， 无像差、大NA物镜出现 1893年，Kohler(科勒 )提出照明方式，充分利用Abbe 物镜的分辨率 在上述研究基础上，到19世纪末，光学显微镜得到了更新，出现了金相显微镜，双目显微镜等 第一章 光学显微镜 第1节 引言 20世纪初，等焦面显微镜出现 二次世界大战前，Zernike(泽尔尼克)原理，相衬显微镜出现 1953年诺贝尔物理学奖 1955年，Nomarski(诺马斯基 )显微镜（微分干涉显微镜） 1977年，Hoffman(霍夫曼 )调制衬度显微镜 第一章 光学显微镜 第1节 引言 光学显微镜示意图1 第一章 光学显微镜 第1节 引言 光学显微镜示意图2 第一章 光学显微镜 第1节 引言 第2节 成像原理 Airy斑与物镜数值孔径的关系 第一章 光学显微镜 瑞利判椐： 第2节 成像原理 第一章 光学显微镜 第3节 聚光系统 聚光系统收集显微镜光源发出的光，将它会聚成各个方向均匀的照明光束，照明样品。 调整聚光系统得到所需的照明光束强度和发射角对获得好的成像质量特别重要。 更换物镜时需重新调整聚光系统的光阑大小。 第一章 光学显微镜 Illumination: Koehler, Nelson, Abbe, critical  It is important that the object be illuminated brightly, evenly, and at high numerical aperture. With Nelson (Abbe, critical) illumination, the condenser is adjusted to focus the light source (such as an oi