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（DP432）植物总RNA提取试 剂盒操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. 植物样品（10-20 mg），研钵，液氮 2. 无水乙醇，β-巯基乙醇 3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ， 1ml）1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free） 4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴台式低温离心机 实验准备-试剂盒准备1 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇， DNase I储存液的配制 加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后 在瓶身做好标记。 将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH O中，轻柔混匀，分装后-20贮存（可保存9个月）。 2 注意：从-20融化后的DNase I储存液保存于4 （可保存6周），不要再次冻存。 实验准备-试剂盒准备2 此步骤建议在通风橱内操作 操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓 度为1%，如1 ml RL中加入10 μl β-巯 基乙醇。此裂解液最好现用现配。配 好的RL 4可放置一个月，裂解液RL 在储存时可能会形成沉淀，如果有沉 淀出现，请加热溶解后使用。 Step 1 50-100 mg植物叶片在液氮 加入450 μl RL，涡旋混匀。 可选步骤 （56孵育1-3 min） 中迅速研磨成粉末 （已加入β-巯基乙醇） 56孵育1-3 min有助于裂解，但对于富含淀粉的样品，请不要加热处理，防止因淀 粉引起的样品膨胀现象） Step 2 将所有溶液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g) 离心2-5 min ，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接 触收集管中的细胞碎片沉淀。 Step 3 缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇（通常为225 μl），混匀（此时可能会出现沉 淀），将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，12,000 rpm(~13,400×g)离 心30-60 sec ，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。 Step 4 向吸附柱CR3中加入350 μl 去蛋白液RW1， 12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec ， 弃废液，将吸附柱放回收集管中。 Step 5 DNase I 工作液的配制： 以一个样品为例：取10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀 （用移液枪轻柔吹打混匀）。 如同时提取多个样品，建议混合统一配置DNase I 工作 液。如样品较多建议在配置时预留出一定的量，以免因 移液器的误差或枪头吸附造成总量不够的情况。 Step 6 向吸附柱CR3中央加入80 μl 的DNase I 工作液， 室温放置15 min。 Step 7 向吸附柱CR3中加入350 μl 去蛋白液RW1， 12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec ， 弃废液，将吸附柱放回收集管中。 Step