家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆与表达.pdfVIP

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2017-06-07 发布于北京
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家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆与表达.pdf

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业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (2): 202~206 ·研究论文· 家蚕质多角体病毒基因的克隆、表达及定位* 1,2 1 1 1 1 2 1 京臣戴伟君谭玉蓉杨艺峰张勤奋徐兴耀张景强 ** (1. 中山大学生命科学院生物防治国家重点实验室，广州510275 ； 2. 华南农业大学动物科学学院，广州510642) 摘要：应用分段RT-PCR 的方法从家蚕质多角体病毒( ，BmCPV) 中国株的dsR- NA 中成功地克隆了基因 (RNA-dependent RNA polymerase) ，基因序列全长 3 69 1 bp ，并登录GenBank ，序列号为 AY496445 。利用质粒载体pET-28b 成功地构建了表达质粒pET28b- , 并用IPTG 诱导的方法在大肠杆菌( 分子量约为，，进行免疫标）BL21(DE3)中获得表达， 138 kD 。以重组蛋白的兔抗为一抗 15 nm 山羊抗兔IgG- 胶体金为二抗记，电镜定位，结果显示在病蚕中肠的柱状细胞的游离病毒粒子和多角体内的病毒粒子上均能结合胶体金颗粒，标记率为35% 证明。左右， BmCPV 病毒的RDRP 复合物确实位于病毒衣壳上关键词：家蚕质多角体病毒；基因；表达；免疫电镜 Cloning, Expression and Location of the RNA-dependent RNA Polymerase Gene from SUN Jing-Chen1,2 DAI Wei-Jun1 TAN Yu-Rong1 YANG Yi-Feng1 1 2 1 ZHANG Qin-Fen XU Xing-Yao ZHANG Jing-Qiang ** ( ） gene of the (BmCPV) (China strain) was cloned by step-by-step RT-PCR. The whole gene of 3 6