抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制与其特性.pdfVIP

畜牧兽医学报，2~001，32(6)，556—562 ActaVeterinariaetZootechnicaSi c口 抗 J亚群禽 白血病病毒囊膜糖蛋 白特异性 单克隆抗体 的研制及其特性 秦爱建 ，崔治中，LEELUCY ，FADLYALY (1．扬州大学动物 医学系 ，扬州 225009；2．AvianⅡ鼢 seandOnoologyLaborato~ USDA，EastLansing，MI48823 USA) 摘 要 ：J亚群青白血病病毒(ALv J)是一种主要感染肉用型鸡 的反转录病毒。本研究用表达 ALv J囊膜蛋 白基因产物的Sf9细胞免疫 Bolb／c小 鼠，取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞 NS1进行融 合 ．获得了4株特异性抗 ALv—J的单克隆抗体。免疫荧光分析结果表明，3株单克隆抗体仅与所 试验的A工，v—J毒株反应 ，而不能与ALv的A、B、C、D和 E亚群的毒株反应。有趣 的是 ，有一株 单克隆抗体可以与所有试验的外源性 ALv毒株反应 ，但不与内源性 的E亚群反应 。WesterttBlot 和免疫沉淀试验结果表明，单克隆抗体识别 的ALv—J囊膜糖蛋 白的分子量为90—94kD，识别未 糖基化的囊膜蛋 白分子量约为 53kD 用这些单克隆抗体艟检测出ALv—J病毒感染鸡胚成圩维 细胞 中的病毒抗原。这些结果提示这些单克隆抗体可用于ALv J痰病的诊断和流行病学调查。 关■词 ：青 白血病病毒 ；J亚群 ；囊膜蛋白；单克隆抗体 中圈分类号 ：S852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：0366—6964(2001)06—0556—07 鸡群中引起肿瘤的禽白血病病毒 (ALv)可分为 A、B、C、D、E和J亚群 ，其 中J亚群是 9O 年代鉴定出来的新的病毒亚群 ，在商品肉用型鸡中ALV呈现流行趋势。由于肿瘤死亡 ，胴体 废弃等而造成严重的经济损失L1．2j。在 ALV—J特异 的蛋 白质中，病毒子的表面囊膜糖蛋 白 是主要的亚群特异性决定因素L3一，这些新毒株作为一种新的独立的囊膜亚群 已得到其核酸序 列的验证 ，，然而，有关J亚群病毒的快速检测方法 目前 尚未建立 ，EL1SA检测病毒群特异 性抗原 (gsa)_5j虽然可 以检测 ALv—Jgsa，但这种试验 同时也能检测出某些样品中的内源性 的病毒 gsa。PCR方法受到ALV—J的~-／／v基因序列和正常鸡群中同源基 因的干扰_6一，另外 还受到抗原变异性的困扰L7J。单克隆抗体在分子生物学和临床诊断 中是非常有用 的工具 ，本 研究试图通过研制抗 ALV—J特异性单克隆抗体以用于 ALv—J分子生物学上更深入 的研 究，同时为临床诊断提供高质量的检测试剂。 1 材料与方法 1．1 病毒 ADOL—Hcl，ADOL一6803，ADOL一4817，ADOL一5701，ADOL一0661株病毒分 离于美国鸡场，并已鉴定为ALv—J亚群的成员[。HPRS103由英国动物健康研究所 Payne 和Vanugopal博士赠送 ，并仅用于体外实验。RAV一1、RAV一2、RAV一49、RAV一50、RAV一 收藕 El期：20OD* 16 薹奎项 目：江苏省教委留学回国基金；扬州大学博士启动基盘 作者俺卉：秦爱建(1961一)．男，江苏通州人 ，副教授 ，博士，主要研究方 向是动物分子病毒学和免疫学。 6期 秦爱建等 ：抗 J亚群禽 白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性 557 0株均由AvianDiseaseandOnoologyLab，USDA，EastLansingMI保存 ，分别代表 ALV亚群 A、B、C、D和 E。 1．2 细胞 DF1细胞系 9【]和能抵抗E亚群ALv(c／E)的0系鸡胚成纤维细胞 (cEF)，以及对 所有ALV亚群都易感的 15B1系CEF用于病毒的传代和扩增 ，培养基为Leibowitz—McCoys 培养基 (GIBCO Laboratories，GrandIsland，NY)，含有 5％犊牛血清 (CFS)作为生长培养基 ，或 1％CFS作为维持生长培养基 。 NS1小 鼠骨髓瘤细胞生长于 HT完全培养基 ，融合筛选培养基为HAT培养基。 1．3 免疫和融台 用于研制抗 ALV—J特异性单克隆抗