生化仪-姜敬学.ppt

全自动生化仪基本测定原理 深圳市龙岗区中医院检验科 姜敬学 讲课内容 光谱分析原理 酶学分析技术 自动生化分析技术 全自动生分析仪的维护 一、光谱分析技术 紫外-可见光分光光度法：当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光被吸收，另一部分光透过溶液。设入射光为I0 透射光为I，I/I0 为透光度，透光度的负对数称为吸光度（absorbance,A） A=-logI/I0 (注：有些生化仪是原始吸光度；有些生化仪是通过光电倍增管放在104，日立生化仪采用后者。) Lamber-Beer定律 Lamber-Beer定律：是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础 A=KLC A为吸光度，K为比例常数即吸光系数；L为溶液层厚度，称为光径；C为溶液浓度。 当L=1cm, C=1mol/L在固定条件下（入射波长，温度等 ）特定波长下K为摩尔吸光系数ε是物质的特征性常数。 如NADN，NADPH在340nm下 ε为6220 酶学分析技术 酶活性的概念：酶活性即酶促应速度，指在规定的条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。设底物浓度为〔S〕，产物浓度为 〔P〕，时间为t,反应速度为v, 则v=-d〔S〕/dt或v=-d〔P〕/dt 酶活性单位：有惯用单位，国际单位IU和Katal单位;1IU=1/(60X106)=16.67n Katal 酶促反应进程 米-曼氏方程：: Km=（Vmax –V）[S]/ V Km值的应用：1鉴定酶的种类，2反映酶与底物的亲的力，3选择酶的最适底物，4计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最大反应速度的比率，5设计适宜的底物浓度（浓度范围设计在10-20 Km，初速度可达最大速度的90-95%因只有初速度才能真正代表酶活性。 Vmax的应用及Vmax，Km的测定 酶活性测定方法及酶学分析的类型 1、固定时间法（即速率两点法）如：TBA 2、连续监测法（即速率A和速率B）如ALT，AST，GGT，CK，LDH等。 3、工具酶和指示酶：如GOD-POD测GLU试剂中的POD是工具酶；ALT、AST、LDH、CK等试剂中的NADH是指示酶； 自动化分析仪工作原理 自动化分析仪的分类 1、连续流动式自动化分析仪 2、离心式生化分析仪 3、分立式生化析仪 4、干化学式自动化分析仪 自动化分析仪的基本结构 1、样品系统；包括样品，校准品，质控品；样品盘，传送规道，加样器，试剂室等。 2、反应系统：比色杯，混合装置，恒温装置， 3、给排水及清洗系统。 4、光路检测系统：光源灯（氙灯，卤素灯，卤素石英灯；卤素灯的使用寿命较短，一般只有1000-1500小时；氙灯使用寿命长，24小时可工作数年），分光装置有干涉滤光片和光栅分光，干涉滤光片价格便宜，但易变潮变霉，从而影响检测结果的准确性。光栅分光可分为全息反射式光栅和蚀刻式凹面光栅；前者易被腐蚀，后者有耐磨损，耐腐蚀，无相差，可以色散也可以聚光比较好。 5、计算机控制系统：电脑主机，显示器、系统及配套软件等。 自动生化分析的基本原理 1、可见、紫外分光光度法： Lamber-Beer定律。 2、免疫比浊测定法：透射比浊法和散射比浊，全自动生化仪多采用前者。 3、均相酶免疫分析法:目前国内临床上全自动生化仪较少采用。 4、酶促反应法。 自动生化分析仪的基本测定方法 1、终点法，一点终点法；以试剂和样品混合之前的空气空白、水空白、或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应终点吸光度减去空白读数为△A；两点终点法： △A= A2 - A1 ;反应曲线见生化。 2、连续监测法即速率法：零级反应速法即速率A法；零级反应期内,每隔一定时间(常为2-30S)读取1次A值,至少取4点得到3个△A; 一般读取6个点;在用最小二乘法处理求出单位时间内的反应速率△A/min；线性度检查前2/3斜率减后2/3斜率然后除以总斜率;一般设为15%一些酶活性项目可以适当放大但不超过30%.反应曲线见生化仪。 3、两点速率法即所谓拟一级速率法：在反应时间中选取两点t1,t2,读取吸光度A1，A2，通过 （ A2 - A1 ）/（t2-t1）计算△A；它与连续监测法比较缺点在于人为确定t1，t2不定因素较多不能保证反应在t1-t2期间呈线性，影响结果准确性；应在常规测定前，先做预试验来确定线性时间段。如TBA;反应曲线见生化仪。 自动生化分析的基本原理 4、速率B法即在1个通道