【2017年整理】生物化学实验十一SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测.docVIP

实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测 定蛋白质分子质量 一、目的要求 学习和掌握采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子质量的基本原理和方法。 实验原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr）和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下聚合交联形成的三围网状结构。通过改变单体Acr浓度或单体与交联剂的比例可以控制凝胶孔径的大小，这取决于两个重要的参数T和C，其中T是两个单体（Acr和Bis）的总百分浓度，C是与总浓度有关的交联百分浓度。 T=（a+b）/m×100(%) C=b/(a+b)×100(%) 式中，a为Acr质量（g）；b为Bis质量（g）；m为水或缓冲液的终体积（mL）。 聚丙烯酰胺凝胶电泳分为连续的和不连续系统两种。在连续系统中，电泳槽中缓冲液的pH与凝胶中一致，而在不连续系统中上述两者的pH不相同，不连续系统的分辨率较高。从凝胶形式上可分为柱式或板式。将凝胶装于垂直的玻璃管中进行电泳分离称柱式电泳，此法制备凝胶方便，样品需要量少，凝胶条便于长期保存；板式电泳的优点是可以在同一凝胶板上同时检测盒比较多个样品，在平板电泳的基础上还建立了分辨率更高的双向电泳。 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳系统具备三种效应，因此大大提高了分辨率。 (1)浓缩效应：在电泳开始时，样品在浓缩胶与分离胶界面上形成了高度压缩的薄层，作为在分离胶中进一步分离的