PCR快速检测在细菌质控考核盲样鉴定中应用.doc

PCR快速检测在细菌质控考核盲样鉴定中应用 　　【摘要】 目的：对多重PCR和荧光PCR两种核酸检测方法在多项目质控样本中的检测应用进行初步评价。方法：同时采用三种方法对多项目盲样质控样本进行检测，包括多重PCR、荧光PCR及传统的国标方法。结果：食源性致病菌盲样（W-B11）中采用多重PCR、荧光PCR均检出金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌核酸阳性，培养法同步分离并鉴定为金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌，三种方法检测结果一致。结论：PCR法结合培养法对于多项目质控样本中病原菌快速初筛分离具有重要意义，可减少传统培养法漏检的可能性，提高检测效率 【关键词】 细菌盲样； 聚合酶链反应； 多项目质控考核 【Abstract】 Objective：To evaluate multi-PCR and real-time PCR methods on detection of multi-blind quality control projects.Method：Multi-PCR，real-time PCR and traditional international standard method were used in the blind quality control projects at the same time.Result：Multi-PCR and real-time PCR methods detected W-B11 positive of Staplylcoccus aureus nucleic acid and Bacillus cereus nucleic acid by both.The culture method was isolated and identified as Staphylococcus aureus and Bacillus cereus.The results of the three methods were consistent.Conclusion：The PCR method combined with cultivation method for pathogenic bacteria in the multi projects quality control sample rapid screening has important significance in separation，can reduce the possibility of missing in the traditional training method， improve the detection efficiency. 【Key words】 Bacteria blindness samples； PCR； Multi-blind quality control projects First-authors address：Nanjing Municipal Center for Disease Control and Prevention，Nanjing 210000，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.04.012 食源性致病菌是危害食品安全和人类健康的主要因素，对食源性致病菌的检测是食品卫生安全检测中一个重要的部分[1-3]。常见的食源性致病菌不仅包括食品中常见的金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌、蜡样芽孢菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等致病性弧菌、变形杆菌属、空肠弯曲菌、阪崎肠杆菌，还应当包含常见的致泻性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌[4-6]。在细菌盲样检测的质控考核中，面临同时检测多种细菌、以免遗漏的问题[7-10]。目前在实际检验工作中常用于检测和鉴定食源性致病菌的方法主要还是分离培养、生化鉴定的方法，本研究中，笔者同时应用多重PCR、荧光PCR、传统分离培养3种方法对江苏省疾病预防控制中心下发的食源性致病菌盲样进行检测，现将检测过程报告如下 1 材料与方法 1.1 盲样来源 江苏省疾病预防控制中心下发的食源性致病菌盲样W-B11，西林瓶中真空粉末状样品。无菌打开西林瓶，立即（1 min内）加入3 mL稀释液（无菌生理盐水）进行溶解，待溶解后吸出放入无菌瓶中，反复用稀释液清洗西林瓶内壁，稀释液合计50 mL，5瓶总共稀释至250 mL，回收清洗液放入同一无菌瓶中，此溶液是待检样品 1.2 培养基 3%氯化钠碱性蛋白胨水、mEC肉汤、Bolton肉汤、TTB增菌液、SC增菌液、志贺氏菌增菌肉汤、7.5%氯化钠肉汤、改良磷酸盐缓冲液、mLST-Vm、HE琼脂、改良CCD琼脂平板、改良Y培养基、C