香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对小鼠肝癌细胞Hca生物学功能的影响.pdfVIP

第34卷第 1期 大 连 医科 大 学 学 报 Vo1．34NO．1 2012年2月 JournalofDalianMedicalUniversity Feb．2012 香菇菌 C91—3凋亡相关蛋 白24414对小鼠肝癌 细胞 Hca生物学功能的影响 刘 奔，钟民涛，王晓丽，孙文长，宁安红，李星云，刘 磊，黄 敏 (大连医科大学 微生物学教研室，辽宁 大连 116044) 摘要：[目的]通过诱导表达香菇菌C91—3凋亡相关蛋白24414，研究其对小鼠肝癌细胞Hca的生物学功能影响， 探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。[方法]构建真核重组表达质粒pPIC9K一24414，用毕赤酵母GS115体系进行诱 导表达，将 已鉴定的诱导表达蛋白作用于小鼠肝癌细胞Hca，用MTT法测定不同浓度 目的蛋白组、顺铂 (DDP)组及 空白对照组的抑瘤率，用流式细胞术检测 目的蛋白对肿瘤细胞的凋亡作用，同时用MTY法检测 目的蛋白对正常鸡 胚成纤维细胞的毒性作用。[结果]Western—blot结果显示 目的蛋白成功表达；MTT法检测结果显示，不同浓度此 蛋白对Hca细胞的生长抑制作用(OD595)与对照组比较差异均有显著性意义 (P0．05)，7．5 g／mL、15 g／mL 和 30 g／mL目的蛋 白的最大抑瘤率分别为70．03％、82．02％和 74．66％，均超过 5txg／mLDDP的作用；流式细胞 术结果显示，此蛋白具有诱导Hca细胞凋亡的能力，早晚双期细胞凋亡诱导率与对照组比较差异均有显著性意义 (P0．05)，浓度为30 g／mL时诱导凋亡的作用最强，早晚两期凋亡率分别为 (9．28±0．04)％和 (9．37± 0．03)％；同时此蛋白对正常细胞无毒性作用。[结论]香菇菌C91—3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母 GS115中 成功诱导表达，此蛋白对小鼠肝癌细胞Hca生长具有抑制作用，能够诱导其产生凋亡，为进一步深入研究香菇菌 C91—3的抗肿瘤机制奠定了基础 。 关键词：香菇菌；毕赤酵母 ；蛋 白；功能；凋亡 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1671—7295(2012)01—0030—06 Study ofbiologicalfunctionofLentinusedodesC91-—3apoptosisprotein 24414onmousehepatomaHcacellline LIUBen，ZHONGMin—tao，WANG Xiao—li，SUNWen—chang，NING An—hong， LIXing—yun，LIU Lei，HUANG Min (DepartmentofMicrobiology，DalianMedicalUniversity，Dalian116044，China) Abstract：[objective]Toexpressandcharacterizetheapoptosisprotein24414ofLentinusedodesC91—3inPichiapas— torisGS115．StudythebiologicalfunctionofthecharacterizedproteinonmousehepatomaHcacellline．[Methods]Con— strnctrecombinantplasmidpPIC9K一24414．InducetheinterestproteintobeexpressedinPichiapastorisGSI15．Co—cul— turedthecharacterizedproteinwithHcacel1lineanddetecteditwithflowcytometrytostudytheapoptosisfunction．Atthe