1.2基因工程的基本操作程序1.ppt

尝试回忆 1.可以连接两种末端的DAN连接酶是？其连接哪种末端的效率比较低？ 2.限制酶的主要来源？作用部位是？ 3.限制酶作用结果 4.限制酶的作用特点 5. DNA连接酶的作用结果 6.DNA连接酶的作用 7.“分子运输车”具备的条件 8.基因工程的基本操作程序主要包括哪四步 9.质粒的定义（记忆） 基因操作的基本步骤 基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取 （2） （3）将目的基因导入受体细胞 （4）目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因； （2）利用PCR技术扩增目的基因； （3）通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 （一）从基因文库中获取目的基因 1.什么叫基因文库？ 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 1.DNA连接酶的作用 2.DNA连接酶的作用结果 3.基因中具有启动子的基因文库是 4.物种间的基因可以交流的基因文库是 5.PCR技术的全称？原理是？前提是？ 6.基因工程的核心是？ 7.基因表达载体的组成 8.将目的基因导入植物细胞的方法？动物细胞？ 9.检测目的基因是否导入受体细胞的方法是？是否转录的方法？是否翻译的方法？ 10.标记基因的作用 附：标记基因的筛选原理 前提：载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。 过程：含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性，然后在培养基中加入该抗生素。 结果：在培养基上，被抗生素杀死的是没有抗性的受体细胞，没被杀死的具有抗性的受体细胞得以筛选。 阅读课本P8-15，自主探究以下问题 1.PCR技术的名称 概念 原理 前提 过程 目的 2.基因表达载体的构建的目的 组成及各组成的作用（启动子 终止子 标记基因）重点 3.将目的基因导入植物细胞的方法 4.转化的概念 5.农杆菌的特点 6.将目的基因导入动物细胞的方法 （附：受体细胞通常是受精卵，因为受精卵具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞中得到表达） 7.原核生物的特点 8.检测目的基因是否导入的方法？是否转录的方法？是否翻译的方法？ 9.基因探针的概念（放射性同位素等标记的含有目的基因的单链DNA片段） 思考1： 表达载体为什么一定要有启动子？ （1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能有利于基因的表达； （2）通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体细胞无法转录。 思考2：终止子的作用是什么？ 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。 基因工程技术路线 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 思考？ 1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次， 理论上至少需要几个引物？ 2×（2n-1）(n为循环次数) （24-1）×2=30 PCR的基本反应步骤 变性 90-95?C 延伸 70-75?C 退火 55-60?C PCR总结： 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 归纳：获取目的基因的方法 用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 1.过程: 二、构建表达载体 —— 核心 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 过程: 2.基因表达载体的目的 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在并可以遗传给下一代； （2）使目的基因能够表达和发挥作用。 科学家在培育抗虫棉时，经历了多次失败，才获得成功。 起初把苏云金芽