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体外分析技术 体外分析技术分类 放射免疫分析法 免疫放射分析法 非放射性标记免疫分析技术 放射免疫分析法 Radioimmunoassay，RIA 基本原理 基本方法 质量控制 基本原理 利用特异抗体与标记抗原和非标记抗原的竞争结合反应，通过测定放射性复合物量来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。 基本试剂 抗体：高亲和力、高特异性、高滴度 标记抗原 （1）比活度和放化纯度必须足够高，以保证分析的灵敏度 （2）半衰期不能太短，使之有足够长的寿命以完成整个分析过程 （3）不改变原有抗原的特性（特异性、亲和力、免疫活性等） 标准品 RIA操作的基本步骤 加样 孵育 分离结合与游离部分 测定放射性 数据处理，打印报告 废物处理 复合物和游离抗原的分离 抗原抗体在液相环境中起反应，终止反应时用一定方法收集复合物测量放射性 ：双抗体沉淀法，聚乙二醇沉淀法、葡萄球菌A蛋白沉淀法、活性炭吸附法、微孔滤膜过滤法等。 预先将抗体吸附在某种固体支持物上，抗原抗体反应就在支持物上进行，反应结束后只需将周围未结合的游离抗原洗去，测定固体支持物上的放射性。 质量控制 质量控制的目的：对分析工作的误差进行经常性的检查，遇有质量异常则及时采取对策，以保证分析误差控制在可接受的范围内，包括实验室内部和实验室间质控两方面。 放射免疫分析误差: 随机误差和系统误差 质量控制指标: 稳定性、灵敏度、准确度 免疫放射分析法Immunoradiometric assay，IRMA 基本原理 用过量的标记抗体与非标记抗原形成复合物，用免疫吸附剂除去多余的游离抗体，复合物的放射性与非标记抗原的量成正比。 IRMA的主要特点 属于非竞争性抗原抗体结合反应 抗原抗体复合物的量与所加非标记抗原的量呈正相关 在低剂量下不会有不确定因素 IRMA的非特异性结合对低剂量区影响大，对分离条件的要求严格。对于RIA来讲，低剂量区放射性高，非特异结合主要影响高剂量区。 非放射性标记免疫分析技术 提高灵敏度、减少放射性废物、提高自动化程度 非放射性标记免疫分析方法 酶标记免疫分析技术 化学发光免疫分析技术 时间分辨荧光免疫分析技术 蛋白芯片与基因芯片技术 * 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 B/(B+F) F/ (B+F) B/F 三种标准曲线 F=游离*Ag, B=*AgAb, F+B=总*Ag 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科 上海交通大学 上海市第六人民医院 核医学科