基本技术操作规程.docVIP

1. 目的 保证检验前的质量控制，并对合格的标本进行规范的接种，不同类别的标本按照不同的接种方法，选择不同的培养基，有针对性地分离出有临床意义的致病菌。 2. 范围 微生物实验室所有标本。 3. 职责 微生物实验室检验人员应遵守本程序。 4. 程序 4.1 标本接种的优先处理原则 所有标本到达微生物实验室后都需及时处理，依据标本的性质，制定标本优先处理的四个水平方针，第一水平的标本需立即接种处理，第四水平的标本可延迟处理，以下为临床标本优先处理的四个水平方针。 4.1.1 水平一标本 分类属于“危险的或易被污染的”，是由于疾病入侵性质的严重性或所检测的微生物对环境温度等较敏感，容易死亡。此类标本必须立即处理，包括脑脊液、心包液、血液、支气管肺泡灌洗液、心脏瓣膜。 4.1.2 水平二标本 未保护并且能很快退化或污染的菌群能很快大量繁殖，从而改变这些标本的性质，必须很快提供合适生长的环境，使这些标本中营养要求高的微生物得以生长繁殖。此类标本包括痰液、未被列入水平一的体液、组织、伤口分泌物、粪便、脓液等标本。 4.1.3 水平三标本 为需要定量的尿液或定量组织活检标本，延迟处理则会影响到标本检出菌量的精密度。 4.1.4 水平四标本 为床边接种入培养基中的标本（如放入碱性蛋白胨水、血培养瓶、运送培养基的标本），是具有保护的标本，为了处理好较高水平的标本，水平四标本可以延迟处理。 4.2 标本的编号 标本的编号规则根据检验目的的不同，按照标本的接收、标识程序中的编号规则进行编号。 4.3 标本的处理 4.3.1 血液标本 接受标本后，立即对标本进行编号、登记。门诊病人要登记联系方式。将血培养瓶置于全自动血培养仪中培养。抽取血液前，先将血培养瓶颠倒混匀，血培养瓶口用75%酒精消毒。 待酒精干燥后，用一次性1ml注射器抽出待检标本，滴少量待检标本在每块平板上的一区。接种在平皿上的标本采用三分区划线法划线。 参考文献 1周庭银编著，临床微生物学诊断与图解（第二版）.上海科学技术出版社,20071.目的 规范细菌鉴定标准操作规程。 2.适用范围 革兰阴性菌、革兰阳性菌等。 3.职责 检验人员严格执行本程序。 4.程序 4.1.观察菌落大小、颜色、气味、溶血、形态特征等观察内容应记录在跟单上。 4.2.涂片，革兰染色，观察染色性质及细菌形态，大小和排列，球菌、杆菌或螺形菌等内容应记录在跟单上。 4.3.初步生化反应：根据菌落特征和涂片结果选择初步生化反应，如氧化酶、触酶、凝固酶（玻片法）等 4.4.制定细菌鉴定方案 4.4.1仪器鉴定方案（以ATB为例） 4.4.1.1革兰阴性杆菌 选择ID32E卡。 4.4.1.2革兰阳性球菌 选择ID32STAPH ID32STREP卡。 4.4.1.3 酵母菌 选择ID32C卡（酵母菌鉴定卡）。 4.4.2 手工细菌鉴定方案。 4.4.2.1氧化酶阳性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合：葡萄糖O/F、木糖、麦芽糖、硝酸盐、动力、七叶苷等生化反应。 4.4.2.2氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择肠杆菌科细菌鉴定生化反应组合：触酶、硝酸盐、葡萄糖O/F、动力、乳糖、VP、吲哚、甲基红、枸橼酸、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸等生化反应。 4.4.2.3疑不动杆菌氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合。 4.4.2.4革兰阳性球菌，选择革兰阳性球菌鉴定生化反应组合：触酶、凝固酶、CAMP试验、杆菌肽、胆计七叶苷、葡萄糖O/F、木糖、蔗糖、麦芽糖、硝酸盐、七叶苷、甘露醇等。 4.4.2.5革兰阳性杆菌，选择革兰阳性杆菌鉴定生化反应组合：触酶、葡萄糖O/F、胆汁七叶苷、蔗糖、木糖、甘露醇、硝酸盐、脲酶等。 5. 参考文献 1周庭银编著，临床微生物学诊断与图解（第二版）.上海科学技术出版社,2007目的 参考文献 1周庭银编著，临床微生物学诊断与图解（第二版）.上海科学技术出版社,20071．革兰氏染色原理： 革兰氏阳性菌细胞壁上有一层比阴性菌厚的肽聚醣，能与结晶紫紧密结合，不容易被脱色液脱掉，此为染色原理。 2．试剂组成：(BASO革兰氏染色液) 龙胆紫液 碘溶液 脱色液 沙黄溶液 3．染色方法： 3.1涂片待干经火焰固定后，加结晶紫染液染色10秒钟，水洗干净。 3.2碘液媒染10秒钟，水洗干净。 3.3滴加脱色液脱色，侧动玻片，10-20秒钟，水洗干净。 3.4沙黄复染10秒钟，水洗干净，待干，镜检。 4．结果判断： G+菌呈紫色 G－呈红色 5．影响因素： 5.1涂片要均匀，厚度要适当，染妇科白带应稍延长染色时间，以镜检下细菌单个均匀分布为度。 5.2微火固定标本，以60℃为宜。 5.3染色时必须按操作规程进行，每次滴加染色液必须覆盖整个涂抹标本。脱色时间要适度，