关于血清的一问题.docVIP

实验室里常会遇到的关于血清的问题 1.保存血清最好的方法? 我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗? 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。 3.如何解冻血清才不会使产品质量受损? 我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 请勿将血清置于37℃太久。 若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。 4.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。 若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g,1-2分钟稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 5.如何避免沉淀？ 按如下操作可避免沉淀的产生： (1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 (4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 (6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 6.为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 7.有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。 而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点” ，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。 因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量! 8.细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理？ 一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成， 首先，要肉眼观察培养基是否混浊， 然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。 如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。 如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关： (1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸; (2)血清质量不好，反复冻融的结果; (3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长; (4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点; (5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。 9.细胞培养中如何防止黑点？ (1) 尽可能地减少血清冻融次数。 (2) 培养基无需37℃水浴。 (3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。 (4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。 (5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。 10.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀? 胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成