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蛋白质总结 第四章：蛋白质（重点） 蛋白质概况； 蛋白质的共价结构； 蛋白质的三维结构； 蛋白质的结构与功能的关系； 蛋白质的分离、纯化与鉴定； * * 第3章：氨基酸（重点） 氨基酸分类 氨基酸的酸碱性质 氨基酸的化学反应 氨基酸混合物的分离 知识点 氨基酸：是蛋白质的构件分子，具有酸碱性质、手性、聚 合能力、特定的侧链结构及多样的化学反应； 兼性离子：指氨基酸分子含有一个正电荷和一个负电荷的形式。在氨基酸晶体中或中性水溶液中以兼性离子形式存在； 等电点：指氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的pH。等电点与离子浓度无关，只决定于等电兼性离子两侧的pKa值； 氨基酸类别 非蛋白质氨基酸 蛋白质氨基酸 （20种） 酸性氨基酸 天冬氨酸 谷氨酸 碱性氨基酸 赖氨酸 组氨酸 精氨酸 中性氨基酸 极性氨基酸 非极性氨基 酸 丝氨酸 苏氨酸 半胱氨酸 酪氨酸 天冬酰氨 谷氨酰胺 甘氨酸 丙氨酸 亮氨酸 异亮氨酸 苯丙氨酸 甲硫氨酸 色氨酸 脯氨酸 颉氨酸 氨基酸的酸碱性质 根据酸碱质子理论，HA A- ＋ H+ 氨基酸是两性电解质，既是质子供体，又是质子受体。当氨 基酸完全质子化时，可看作是多元酸；COOH和NH3+可以发 生解离，用Ka表示它们的解离常数；在氨基酸溶液中，pH值 计算公式如下： pH=pKa＋lg（质子受体/质子供体） 当pH大于等电点时，氨基酸带净负电荷；当pH小于等电点时，氨基酸带净正电荷！在一定的pH范围内，氨基酸溶液的pH离等电点愈远，氨基酸所携带的净电荷愈大。 氨基酸的化学反应 α-氨基参加的反应 与亚硝酸反应（生成羟基氨基酸和氮气） 与酰化试剂反应（氨基被酰基化而被保护） 烃基化反应 DNFB反应（生成DNP-氨基酸） PITC反应（生成PTH-氨基酸） 形成西佛碱反应（与醛类化合物） 脱氨基反应 α-羧基参加的反应 成盐成酯 成酰氯（与二氯亚砜等） 脱羧基反应 叠氮反应（氨基酸酯与肼、亚硝酸） α-氨基与α-羧基共同参加反应 与茚三酮反应（氨与还原茚三酮发生作用生成紫色物质） 成肽反应 侧链R基参加的反应 酪氨酸酚羟基 组氨酸咪唑 精氨酸胍基 色氨酸吲哚基 半胱氨酸巯基 氨基酸的旋光性与光谱性质 氨基酸的旋光性： 氨基酸的构型（指α-碳）也以甘油醛为参考物，从蛋白质的酸水解或酶水解液中得到的都是L型，但D型氨基酸在自然界也存在；蛋白质用碱水解或有机合成氨基酸时，得到的都是无旋光性的DL-消旋物 氨基酸的光谱性质： 参与蛋白质组成的20多种氨基酸在可见光区没有光吸收，在红外区和远紫外区都有光吸收，但在近紫外区只有芳香族氨基酸有光吸收； 氨基酸混合物的分析分离 分离方法 柱层析 纸层析（相对迁移率，非极性性质） 薄层层析 离子交换层析（电荷和非极性） 气相层析 高效液相层析 氨基酸洗脱顺序的判定：氨基酸与树脂的亲合力主要决定于它们之间的静电吸引，其次是氨基酸侧链与树脂聚苯乙烯之间的疏水相互作用；亲和力愈大愈难洗脱！ Ⅰ蛋白质概况 蛋白质的化学组成：碳（50%）、氢（7%）、氧（23%）、氮（16%）、硫（0-3%）、其它元素微量；蛋白质的平均含氮量为16%，此为凯氏定氮法测定蛋白质含量的基础。 蛋白质是一类最重要的生物大分子，英文称protein，意为“最原初的，第一重要的”。 分类Ⅰ 单纯蛋白质（如清蛋白、球蛋白、组蛋白、谷蛋白、硬蛋白等） 缀合蛋白质（如糖蛋白、脂蛋白、核蛋白、金属蛋白、黄素蛋白等） 分类Ⅱ ：按生物学功能可将蛋白质分为酶、调节蛋白、结构蛋白、转运蛋白等等； 分类Ⅲ 分类Ⅳ 纤维状蛋白质（一般不溶于水。典型的有：胶原蛋白、弹性蛋白、角蛋白、丝蛋白、肌球蛋白等） 球状蛋白质（可溶性好。典型的有：胞质酶类等） 膜蛋白（与细胞的膜系统结合而存在） 单体蛋白质 （寡）多聚蛋白质 蛋白质结构的层次 构象：指具有相同结构式和相同构型的分子在空间里可能的多种形态；构象形态间的改变不涉及共价键的破裂！每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构或三维结构，称之为蛋白质的构象；一个给定的蛋白质可以有多种构象，但只有一种或少数几种在能量上是有利的。 蛋白质的结构 一级结构（即共价结构，指多肽链的氨基酸序列） 二级结构（指多肽链借助氢键形成α螺旋和β折叠片） 三级结构（指多肽链借助各种非共价键弯曲、折叠成具有特定走向的紧密球状结构） 四级结构（指多聚蛋白质的各亚基之间在空间上的相互缔合关系） 蛋白质的一级结构即多肽链的氨基酸序列决定蛋白质的高级结构！ 蛋白质的功能：催化、调节、转运、储存、运动