植物组织培养实验指导.docVIP

实验一 培养器皿的洗涤与环境的消毒培养基母液的配制 实验二 植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌实验三实验四 茎段的培养 实验五 海棠叶片的离体培养 实验六 离体培养 实验七 组织培养物的继代培养 实验八 马铃薯脱毒与组培快繁 实验 沙棘组织培养实验方案设计及实施 实验 培养器皿的洗涤与环境的消毒培养基母液的配制 常用组织培养的玻璃容器及接种用的玻璃器皿如锥形瓶、培养皿、试管、配置培养基用的试剂瓶、烧杯等以及金属的镊子、剪刀、接种铲等，用前必须经过洗涤，有的还要消毒。 器皿的洗涤方法 1.一般玻璃器皿，特别是第一次使用的新的玻璃器皿，首先用清水充分浸泡后用碱水刷洗，然后用清水充分除去碱液，再用无离子水或蒸馏水刷洗干净后烘干或晾干，待用。 检查玻璃器皿是否洗刷干净的标准是：洗后的玻璃器皿沾水后，布满于整个玻璃表面并形成完整的水膜，而不会有不均匀的水珠出现。 当玻璃器皿十分肮脏，带有不同的污渍时，则需要特殊的洗涤液浸泡4-12小时，然后再用清水漂洗干净，较常用的是铬酸洗液，它是用重铬酸钾加入浓硫酸配制而成，其腐蚀性极强，对衣物、皮肤等均十分有害，一般尽量避免使用。目前生产有各种合成的化学洗涤剂，可清除各种污物，使用方便，是实验室内常用的。 2.金属用具在第一次使用前必需先用四氯化碳或乙醚等有机溶剂将其表面的防锈油擦洗干净，用布擦干方可使用，每次使用后需用水清洗并保持干燥。 器皿及环境的消毒方法 器皿的消毒方法分为： 物理方法 又可细分为： 干热消毒法（Dry heat sterilization）：适用于玻璃器皿、金属和一些不怕高温的物品，如培养皿、锥形瓶、各种试剂瓶、刀、剪、镊子等。一般在150℃烘箱内烤2-3小时，在消毒灭菌前将所要消毒的物品包装于固定容器或耐热的包装材料内（如饭盒、培养皿灭菌筒、铝箔纸等），防止在使用前的再次污染。 湿热消毒法（Wet heat sterilization）：不能用干热消毒的物品，如配置好的培养基、易燃的棉花、工作服、口罩等，要使用高压灭菌锅，通过水蒸气压达到灭菌消毒的目的，常用气压为15磅或1.2kg/cm2温度为121-124℃，灭菌20分钟即可达到杀灭细菌、消毒的目的。 超滤消毒法（Ultrafiltrate sterilization）：不耐热易在高温下分解破坏的药品如某些酶类，某些具有生物活性的物质，如椰乳、抗菌素等，高热常使之失效，常用超滤膜或微孔滤膜过滤，将细菌等污染源除去后方可使用，常用0.45μm孔径的或0.63μm和0.45μm孔径合用，可将最小的细菌除掉，一般细菌的大小为1μm左右。 紫外光灯消毒法（Ultraviolet irradiation）：因消毒效果较弱，要较长时间照射方可达到消毒效果，因此只作辅助方法，如一个1.2×1.2×2.4 实验二 培养基配制 植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单，而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型，要求的营养条件十分复杂，因此在人工合成培养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。 一、实验目的 掌握。 二、实验材料 仪器 冰箱、天平（0.0001g） 容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺 标签纸、胶水、记号笔 药品 50% 酒精、95% 酒精、1 盐酸1N盐酸（HCl）的配制：取浓盐酸82.5ml，加入蒸馏水1000ml，即为1N的HCl、1 NaOH(1N氢氧化钠（或氢氧化钾）的配制：称40 g NaOH（或氢氧化钾57.1g）加入蒸馏水1000ml，即为1N的NaOH(1N的KOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品蒸馏水 三、实验步骤 按照培养基配方把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。如MS培养基各种母液的配制步骤如下： 1、大量元素母液： 包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液l00 ml或50 ml。 2、微量元素母液： 因用量少，为了称量精确和方便常配成100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解，混合在一起成