茎尖培养脱毒技术.ppt

* 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 2．茎尖大小与脱毒效果 用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最大直径0.lmm；通常是带1～3个叶原基的茎尖（约0.3～0.5mm）。 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的1～3个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒效果差。 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 1．取样：用于脱毒的植株应是患病群体中病害相对较轻的植株。可直接从选定的植株上取梢段进行消毒接种。也可从室内培养1～2月并进行热处理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消毒接种。 2．消毒：剪取梢段（也可用侧芽）3～5cm，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75％酒精中浸泡 30s左右，用1％～ 3％次氯酸钠或 5％～7％的漂白粉溶液消毒10～20min（或用 0.1％HgCl2消毒数分钟），最后用无菌水冲洗材料 4～5次。 （二）茎尖脱毒的方法 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 3．剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。用刀尖切下带1～2个叶原基的生长点（约0.3～0.5mm)。用解剖针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接1～2个茎尖。 为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 5．生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成为完整植株。诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根培养基，继续培养1～2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖），再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100％。 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 茎尖分生组织剥离 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 4．培养 接种后材料置 25?2℃，光照度 1500～5000lx，每日光照10～16h条件下培养。温度对茎尖培养的影响不及光照。不同植物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同，但一般光照培养比暗培养效果好。 培养两个月左右，大的茎尖再生出绿芽，小的（0.1～0.5mm）茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度，可形成大量丛生芽。 植物脱毒技术 一、茎尖培养脱毒 * *