OH的体外活性分析及其对四氧嘧啶糖尿病大鼠影响的研究论文.docVIP

　　OH的体外活性分析及其对四氧嘧啶糖尿病大鼠影响的研究论文 摘要 目的：进一步验证ProProhGHRH(144)OH的生物活性，并观察其对糖尿病（DM）大鼠GHRHGHIGF1轴的影响。方法：（1）取正常大鼠垂体6个，每个垂体分为3份后在体外孵育，将垂体随机分成4组，分别加入0.01、0.1、1.0mg L-1的ProProhGHRH(144)OH和 2.0mg L-1 hGHRH，测定加药前、后GH含量改变。（2）将DM大鼠随机分为GHRH类似物组、GHRH组和DM对照组，分别给予ProProhGHRH(144)OH 1mg L-1、hGHRH(144)OH 2 mg L-1和0.9％生理盐水，另取正常大鼠作为正常对照.freelg L-1的ProProhGHRH(144)OH与hGHRH组3组之间比较，均P＜0.05。（2）DM 3组和正常对照组血胰岛素含量结果示，正常对照组与DM 3组之间比较，均P＜0.01。血IGF1含量4组之间比较均P＞0.05。血GH含量DM对照组与正常对照组之间比较，P＜0.05。GHRH组与DM对照、正常对照组3组之间比较,均P＜0.05。结论：ProProhGHRH(144)OH是一种具有强大促GH分泌活性的GHRH类似物，这种活性存在剂量依赖性，当四氧嘧啶DM大鼠给予ProProhGHRH(144)OH后，能显著增加DM大鼠垂体的敏感性。 关键词ProProhGHRH(144)OH；生长激素释放激素类似物；生长激素释放激素；生长激素；类胰岛素样生长因子1；四氧嘧啶；糖尿病；大鼠 中图分类号R587.1； R33 文献标识码A2006 近年来，人们利用分子生物学原理和方法人工合成了多种生长激素释放激素（GHRH）类似物，并在糖尿病（DM）患者和大鼠模型上研究GHRHGHIGF1轴对GHRH类似物的反应。本试验就是进一步验证GHRH类似物ProPro hGHRH(144)OH的生物活性，并观察其对DM大鼠GHRHGHIGF1轴的影响。 1 材料与方法 1.1 实验动物与主要试剂体重为200~250g的雌性SD大鼠，由东南大学医学院实验动物中心提供。Krebs缓冲液（NaCl 118mmol L-1、KCl 4.7mmol L-1、CaCl2 2.5mmol L-1、MgSO4 7H2O 1.2mmol L-1、NaHCO3 25mmol L-1、KH2PO4 1.2mmol L-1、葡萄糖11mmol L-1、pH 7.4）；四氧嘧啶购自Sigma公司，用生理盐水配成浓度为40g L-1；人GH放免试剂盒、人IGF1放免试剂盒、人胰岛素放免试剂盒均购自天津九鼎生物有限公司。 1.2 ProProhGHRH(144)OH的体外活性分析SD大鼠6只，在30min内取出大鼠垂体6个，将每个垂体分为3份，所有垂体均孵育在装有1ml Krebs缓冲液的玻璃试管中，共孵育5h。18份垂体随机分成4组：A组，4份垂体，在孵育2h末取出缓冲液，测定GH含量作为空白对照，然后加入0.01mg L-1 ProProhGHRH(144)OH 0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测量GH浓度，再重复加药测量2次；B组,4份垂体，在孵育2h末取出缓冲液测GH含量作为空白对照，然后加入0.1mg L-1 ProProhGHRH(144)OH 0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测量GH浓度，再重复加药测2次；C组,5份垂体,在孵育2h末取出缓冲液测GH含量作为空白对照，然后加入1.0 mg L-1ProProhGHRH(144)OH 0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测GH浓度，再重复加药测2次；D组，5份垂体，在孵育2h末取出缓冲液测GH含量作为空白对照，然后加入2mg L-1 hGHRH 0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测GH浓度，再重复加药测量2次。比较各组间加入药物前后的GH浓度变化。 1.3 DM大鼠建模及分组将DM大鼠随机分为GHRH类似物组、GHRH组和DM对照组，每组10只。建模方法为：SD大鼠腹腔注射四氧嘧啶（200mg kg-1），第3天测空腹血糖＞16.8mmol ml-1为模型建立成功。GHRH类似物组每日腹腔注射ProProhGHRH(144)OH 1mg L-1；GHRH组每日腹腔注射hGHRH(144)OH 2mg L-1,DM对照组每日腹腔注射0.9%生理盐水。另取10只正常大鼠作为正常对照组，每日腹腔注射生理盐水。 1.4 标本收集第14天试验终止时所有大鼠禁食12h，常规碘伏消毒腹部皮肤，切开皮肤，股动脉切开取血4~5ml，标记，室温下静置1h，用低温离心机4℃下3000r min-1离心15mi