三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞SMMC 7721的诱导分化作用论文.docVIP

　　三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞SMMC 7721的诱导分化作用论文 马永超，皇甫超申，胡国强，杨锐生，刘彬 【关键词】 三氮唑席夫碱衍生物； 肝细胞癌； 细胞增殖； 细胞分化 【Abstract】 AIM: To study the effect of 3pyridin3yl4［（4hydroxy3methoxybenzylidene）amino］5methylsulfanyl4H［1,2,4］ triazole (LH37) on the induction of differentiation of hepatocarcinoma SMMC7721 cells. METHODS: SMMC7721 cells ined by MTT assay. Cell morphology icroscopy. The reverse transcriptasepolymerase chain reaction (RTPCR) RNA. The specific activities of alkaline phosphatase (ALP) ethod. RESULTS: The cell proliferation ol/L in dose dependent manners. 1×10-5 mol/L LH37 induced the morphological normality of SMMC7721 cells. After treated ol/L or 1×10-6 mol/L LH37, the mRNA expression of αFP arkably declined (P 0.01). CONCLUSION: LH37 may inhibit proliferation and induce differentiation of human hepatocarcinoma SMMC7221 cells. 【Keya；cell proliferation; cell differentiation 0 引言 三氮唑类衍生物具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化的作用［1-2］，但含杂环席夫碱类的该衍生物目前少见报道. 经结构修饰，我们得到了新的三氮唑席夫碱衍生物-LH37. 本研究利用人肝癌SMMC7721细胞株，初步探讨该化合物对癌细胞增殖和诱导分化的影响.freelL/L胎牛血清（天津灏洋生物制品公司）的RPMI 1640培养基（ Gibco公司）中.四甲基偶氮唑蓝（MTT），MMLV逆转录酶，Oligo(dt)15和RNasin (Promega公司)；DMSO (Solarbi公司)；维甲酸（RA）(美国Sigma公司)；金氏法碱性磷酸酶检测试剂盒(北化康泰试剂有限公司). 其余试剂为国产分析纯. 1.1.3 引物合成甲胎蛋白(αFP)和βactin引物序列引自文献［3，4］， 均由上海生工生物工程公司合成. 1.2 方法 1.2.1 MTT试验 细胞以1×104/L接种到96孔细胞培养板，0.2 mL/孔，继续培养24 h后换液，同时加入LH37. LH37按倍比稀释方式加入，最高浓度为1.024×10-3 mol/L，最低浓度为1.6×10-5，共7个浓度梯度（每个浓度5个复孔），对照组只加培养液. MTT试验按照文献［5］的方法进行. 1.2.2 形态学观察 SMMC7721细胞以1×105/L浓度接种于含盖玻片的6孔培养板中培养24 h，1×10-5 mol/L LH37处理细胞96 h后取出盖玻片，瑞氏染色，显微镜观察，对照组只加培养液. 1.2.3 αFP mRNA表达检测 SMMC7721细胞培养至对数生长期加入各种药物，其中用1×10-5 mmol/L RA作为阳性对照；用DMSO（与LH37等体积）排除溶剂的干扰作用；LH37选用1×10-5 mol/L和1×10-6 mol/L两个浓度；阴性对照组不加药. 继续培养48 h弃去培养液，采用异硫氰酸胍酸性酚氯仿抽提法提取总RNA. 逆转录合成cDNA第一链，直接用于PCR扩增. 人αFP上下游引物序列分别为5′ATTCAGACTGCTGCAGCCAA3′和5′GTGCTCATGTACATGGGCCA3′,PCR产物为475 bp. βactin上下游引物序列分别为5′GCACTCTTCCAGCCTTCCTTCC3′和5′TCACCTTCACCGTTCCAGTTTTT3′，PCR产物为516 bp. 反应条件：94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s,共进行35个循环