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二○一二年十二月 普通PCR仪和荧光定量PCR仪的使用 Part I 中心PCR (polymerase chain reaction)仪 简介 Part II PCR 原理 Part III 普通PCR仪操作规程 Part Ⅳ 荧光定量PCR原理 Part Ⅴ 荧光定量PCR仪操作规程 Part I 中心PCR仪简介 荧光定量PCR仪 Rotor gene 3000 普通PCR仪 Gene AMP System 9700 Part II PCR原理 基因表达 转录水平 翻译水平 基因水平 （Real time） RT-PCR Western blot PCR 核酸的功能是储存 和转移遗传信息， 指导和控制蛋白质的合成； 而蛋白质的主要功能是 进行新陈代谢活动和 作为细胞结构的组成成分。 PCR概念 利用DNA聚合酶、一对引物和四种dNTP（三磷酸脱氧核苷酸），对模板DNA反复多次地进行复制，从而得到大量扩增产物的反应过程，称为PCR。 Part II PCR原理 Part II PCR原理 PCR反应五要素 引物（primer） 酶 （Taq DNA polymerase） dNTP（dATP, dGTP, dCTP, dTTP） Mg2+ （magnesium） 模板 （template） Part II PCR原理 PCR扩增的基本反应步骤 1、变性：加热至95ºC左右，使模板DNA变性。 2、退火：降低温度至适合的温度（55ºC左右，引物与模板 DNA的互补序列配对结合。 3、延伸：温度在70ºC左右时，Taq DNA聚合酶从引物3端催化复制链以5 -3方向延伸。 重复1-3步 25-30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 Part II PCR原理 Part II PCR原理 PCR原理 PCR的理论方程：Y=x×(1+ Ev)n Y：扩增物数量； X ：起始模板数量； Ev：扩增效率； n：扩增循环数 Part III 普通PCR仪操作规程 开机操作： 打开PCR仪电源开关； 向后平推PCR仪顶盖，放入PCR薄壁管。 向前平推PCR仪顶盖，并均匀用力将反扣部分压下。 注意： 9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。 PCR仪软件操作指南： Part III 普通PCR仪操作规程 Gene Amp PCR System 9700 Version 3.05 User:*** Run Creat Edit Util User F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop PCR仪软件操作指南： Part III 普通PCR仪操作规程 Select User Name precql lyf …… Accept New Edit Delete Cancel F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop PCR仪软件操作指南： Part III 普通PCR仪操作规程 User Name___ Use ENTER key to select a character. Accept Backsp Cancel F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop abcdefgh ijklmnopq rstuvwxyz PCR仪软件操作指南： Part III 普通PCR仪操作规程 Method size last used Exp000 qin0 9 03/01/06 Exp001 qin1 9 04/10/06 Start View User Sort Cancel F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop PCR仪软件操作指南： Part III 普通PCR仪操作规程 Start Return F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop 1Hld 3Tmp 35Cycles 2Holds 4.0 8 PCR仪软件操作指南： Part III 普通PCR仪操作规程 Method size last used Exp000 qin0 9 03/01