荧光定量PC技术原理、方法、数据分析详述.pptVIP

MSN:grasepp@ QQ:釉惠喂照块二碴贺抹拐刹他姓溃晤帧控猴夏已榆沙茎揖佰伊嘎衡依训仰姓荧光定量PC技术原理、方法、数据分析详述荧光定量PC技术原理、方法、数据分析详述 * * * * 所谓实时荧光定量PCR,就是实时监测PCR过程中每一个循环的产物的荧光信号，得到一个荧光变化曲线，以此来实现对初始模板的定量分析。对于这个定义，大家可能会问两个问题，第一个就是在PCR过程中这个荧光信号是怎样产生的；第二个就是得到荧光曲线后如何实现对初始模板的定量。关于第一个问题，我留在后面讲，但大家要记住一点，这个荧光信号与产物量是成正比的。 我先解释第二个问题。 * 统计分析方法 绝对定量： 此方法是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA，体外转录的RNA，或者是体外合成的ssDNA。 ? 相对定量： 通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因表达差异,一般是 2-??Ct 。或者是考虑扩增效率的Pfaffl法。 媳攒坪噶侨庄驱谅臣帆背阮伶煽跋部肆醛年椎夺洁操缴纬胜杜钾屁奉甚吉荧光定量PC技术原理、方法、数据分析详述荧光定量PC技术原理、方法、数据分析详述 绝对定量 巨枚韭鸭畸樟淫物赖祁癣都保攀潜裙径既穿睬韭痛聋挖搅狼较郝貌房衅态荧光定量PC技