YB1在血液系统肿瘤中的表达及其对耐药白血病细胞生物学特性的影响.pdf

江苏大学硕士论文 V检测白血病细胞的凋亡程度；采用MTT法检测转染前后化疗药物的 mRNA和P-gP表达的变化；采用基因芯片技术比较阳性转染组与对照 组细胞的基因表达的差异。 的YB．1胞核阳性表达率明显高于I～II期、结内病变及无骨髓浸润 的表达，两组的总体表达率无明显差异∽O．05)，P-gP的表达强度与 DLBCL患者的性别、年龄、临床分期、结内外浸润及有无骨髓浸润 效组的P-gp表达强度显著低于化疗无效组(PO．001)。 质粒pGensil一1／U6／YBXl 序列与设计片断的序列完全一致。成功构建了针对YB．1的特异性 shRNA真核表达载体。 Il 江苏大学硕士论文 K562／A02．YBXl 选2周后，流式细胞仪检测显示，阳性转染组和随机片段组荧光强度 均明显高于未转染的K562／A02细胞，提示重组质粒获得较高转染率， 未转染细胞YB一1基因表达量明显高于阳性转染的3组细胞，5组细胞 YBXl (27．44441．3)％和(67．44441．6)％：Westernblotting结果也显示，阳性转染组 YB．1的蛋白条带强度比对照组细胞明显减弱，说明YB．1shRNA的导 入有效地抑制了目的基因的转录与蛋白的表达；生长曲线提示阳性转 染组细胞生长缓慢，细胞周期动力学分析示阳性转染组Gl期细胞增 多，G2期与S期细胞显著减少俨O．05)，提示YB．1的表达可能参与细 胞增殖的调节；在小剂量As203作用下，未转染组无明显凋亡，随机 片段组与阳性转染组细胞均出现凋亡，AnnexinV检测结果显示，阳 性转染组细胞的早期凋亡数量明显高于随机片段组和未转染细胞 能部分地抑制了药物对细胞的诱导凋亡作用；MTT结果显示阳性转染 组细胞的阿霉素IC50明显低于随机片段组和阴性对照俨O．05)； RT．PCR结果显示，阳性转染组细胞中mdrlmRNA水平明显降低，5 IlI 江苏大学硕士论文 0．226；流式检测P—gP表达结果示，阳性转染组P—gP的峰值较对照组明 显左移，提示YB—l可能参与调节mdrl／P—gP所介导的多药耐药；基因 芯片的结果提示YB．1基因表达沉默后，基因转录调节、蛋白翻译合 成、细胞增殖、细胞凋亡、细胞的免疫调节、细胞信号和传递蛋白表 达等均受到明显地影响。其中MAPKKKl3(丝裂原活化蛋白激酶激酶 (n晒受体相关因子5)等基因表达上调。 结论：1．DLBCL中YB．1核阳性定位与P．gp的表达密切相关， 染YB．1特异性shRNA的真核表达载体能减少白血病细胞中YB．1的 表达，减慢细胞生长，加速细胞凋亡；转染YB．1shRNA后的白血病 细胞对化疗药物的敏感性增加。综上，YB．1抑制白血病细胞的增殖， 促进白血病细胞的凋亡，增加耐药白血病细胞对化疗药物的敏感性， 针对YB．1的基因治疗可能逆转恶性造血系统肿瘤多药耐药的一条新 途径。 关键词：YB．1，P．gP，PCNA，弥漫性大B细胞淋巴瘤，RNA干扰， 增殖，凋亡，基因芯片 IV 江苏大学硕士论文 ABSTRACT the ofY-box expressionbindingprotein-1 Objective：Toinvestigate diffuseBcell the analyze (YB．1)in large lymphoma(DLBCL)and YB．1andcell relationbetw