【2017年整理】分子与标记在果树上的应用及前景展望.docVIP

分子标记在果树上的应用及前景展望 分子标记指可遗传并可检测到的DNA序列或蛋白质。蛋白质标记主要是指同工酶、等位酶、贮藏蛋白等等，本文主要介绍DNA标记。理想的分子标记应具有以下几个条件：①以孟德尔方式遗传。②多态性好，自然条件下存在许多变异位点。③遍布整个基因组，能够检测到整个基因组的变异。④共显性遗传，即可以区别纯合体和杂合体。⑤表现“中性”，即不影响目标性状的表达。⑥重复性好，便于资源共享。⑦自动化程度高。近年来，关于分子标记的研究进展很快，本文仅就分子标记在果树研究中的应用及存在问题做一介绍，并对应用前景做一展望。 一、分子标记在果树研究中的应用：　　1.分子标记在种质资源研究中的应用。　　（1）系谱分析和分类。物种在进化过程中，其DNA是一个渐变的过程。遗传关系越近，基因组DNA的差异越小，反之，差异越大。HARADA T等用RAPD标记对两个三倍体苹果品种“乔纳金”和“陆奥”进行了分析，结果表明，作为母本的金冠提供了减数的二倍体配子。沈向等对杏进行了RAPD分析，将41个品种分为5类。　　（2）种质保存和核心种质的建立。如何事理有效地管理和利用种质资源，当今世界出现了两种趋势，其中之一就是建立核心种质。目的是以最少的种质样品重复而最大地包含一个种及其野生种的遗传多样性。分子标记为人们提供了一个有效、快速的途径。目前已建立的核心种质涉及到谷物、豆类、牧草、蔬菜和果树等。AMY K SZEWC-MCFADDEN等用SSR结合园艺性状建立了苹果的核心种质，HOKANSON等也建立了苹果核心种质。　　（3）构建指纹图谱和品种鉴别。高质量的指纹图谱可作为新品种登记、注册和产权保护的重要依据。特别是对于无性繁殖的果树来说，同物异名、同名异物现象很严重，利用分子标忘本中高效、准确地建立指纹图谱、鉴别果树品种。张潞生利用AFLPs建立了清晰的狒猴桃的指纹图谱，宋婉建立了枣优良品种的DNA指纹图谱。祝军对苹果进行了AFLP分析，得到了苹果的DNA指纹图谱，刘孟军对枣和酸枣进行了FRAPD分析，将亲缘关系极近的金丝小枣和无核小枣区分开。　　（4）体细胞杂种和外源基因渗入的鉴定。利用分子标记可在试管苗期快速、准确地对体细胞杂种进行鉴定。史永忠对柑橘进行了体细胞杂种鉴定，认为体细胞杂种表现为双亲谱带之和。另外，珠心胚现象使柑橘合子苗与珠心苗在苗期很难鉴别，严重阴碍柑橘的杂交育种，LURO对柠檬的实生后代RAPD分析指出，杂交合子苗由于有外源基因的渗入，谱带比珠心苗多。　　2.构建分子遗传图谱。　　在人类基因组计划的推动下，新西兰和欧洲的两个“苹果基因组”计划已经启动，同时美国、欧洲也启动了李属植物的基因组作图工程。目前已经建立或初步建立了基因组图谱（险人类基因组图谱为物理图谱外，最近中科院基因研究中心构建了高分辨率的水稻基因组物理图谱，其它绝大多数为遗传连锁图谱）的果树有苹果、桃、樱桃、扁桃、核桃、草莓、葡萄、柑橘、香蕉等十几种。　　建立遗传连锁图谱，首先要有一个作图群体。作图的群体主要有F2、F3、BC等。除此之外，单倍体也可应用于果树基因组作图。“单模标本”策略最初来源于对人的精子的研究，后来用于对针叶松(用大配子群体)和斑马鱼的胚胎研究上。STOCKINGER等以孢子来源的愈伤培养群体为试材，做了甜樱桃的遗传连锁图谱。他认为，以单倍体为试材，大多数随机引物扩增中不能标记的杂和位点不会发生，可以促进连锁图谱的建立。陈洪、李平等利用双单倍体(DH)进行水稻基因组作图，指出：F2代或BC1群体，不能通过种子传代维持，所以难以进一步发展已建成的图谱，而DH株系为一个永久性的作图群体，而且RAPD特别适于DH群体作图。　　HEMMAT M等针对苹果和其他异型杂交的物种，因无性繁殖而且种内杂交受抑以至于很难有可利用的自交或回交群体用于作图这一事实，提出了“双假测交”(Double pseudotestcross)的构想。“双假测交”设想最初应用于同工酶上，HEMMAT将之扩展至RFLP和RAPD技术，利用苹果“Rome Beauty”与“White Angel”杂交，获得F1代，为父、母本分别作图，获得两张遗传连锁图谱。PATRICK J C等利用“双假测交”的构想做了三张连锁图谱，其中“Wijcik Mclntosh”的图谱包括238标记，分布于19个连锁群，覆盖基因组1206 cM；“NY75441—67”的图谱有110个标记，分布于16个连锁群，“NY 75441—58”的图谱有183个标记，分布于18个连锁群。主要为RAPD标记，另外还有6个同工酶标记，4个形态学标记(Rf：果皮颜色；Vf：黑星病；Co：柱状生长习性；Ma：苹果酸)，标记之间的平均距离为5．0cM。　　作图群体确定后，采用分子标记对作图群体进行分析。