狗B淋巴细胞刺激因子(dBAFF)及增殖诱导配体(dAPRIL)的克隆、表达、及其生物学功能的研究.pdfVIP

王书乐：狗 B 淋巴细胞刺激因子及增殖诱导配体的克隆、表达、及其生物学功能的研究 摘要 B 淋巴细胞刺激因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)是TNF 家族中两个关系 密切的成员，它们对淋巴细胞分化和存活起着重要作用。本实验室通过 RT-PCR 结合 RACE 法，从狗脾脏组织细胞中扩增得到 879 bp 的狗B 淋巴细胞刺激因子 基因（简称 dBAFF)和 753 bp 的增殖诱导配体基因（简称 dAPRIL ）。dBAFF 的 开放读码框由 292 个氨基酸组成，在氨基酸水平上与牛、猪、兔、鼠、人 BAFF 的相似性分别为 78、82、76、58 和 80%。dAPRIL 编码 250 个氨基酸，含有一 个跨膜区和 furin 酶切位点。在与猪、人、兔、鼠的比对中发现该蛋白的可溶段 部分(dsAPRIL)的与与之对应的哺乳动物蛋白同源性较高，分别是 91%、86%、 88%和 86%。Real-time PCR 结果显示，dBAFF 和 dAPRIL 在免疫器官中表达量 较高。用 Origami B (DE3) PLysS 高效表达了 NusA 融合的 dsAPRIL 蛋白 (NusA-His-dsAPRIL) 。体外实验证明该蛋白在 anti-IgM 存在下对狗 B 细胞具有共 刺激作用，为 dAPRIL 的进一步研究打下了基础。成功构建了昆虫杆状病毒穿梭 质粒 bacmid-dsBAFF ，以期获得高活性的 dsBAFF 蛋白。 关键词：狗B 淋巴细胞刺激因子；狗增殖诱导配体；基因克隆；昆虫杆状病毒； 细胞存活 I 王书乐：狗 B 淋巴细胞刺激因子及增殖诱导配体的克隆、表达、及其生物学功能的研究 Abstract B-cell activating factor (BAFF) and A Proliferation-Inducing Ligand (APRIL) are two closely related novel members of the tumor necrosis factor (TNF) family, which are involved in immune regulation. In this study, the cDNA of dog BAFF (dBAFF) and dog APRIL (dAPRIL) were amplified from dog spleen by RT-PCR and RACE. The open reading frame (ORF) of dBAFF encodes a protein of 292-amino acid. It shows 78, 82, 76, 58 and 80% amino acid sequence identity with cattle, pig, rabbit, mouse and human BAFF, respectively. The open reading frame (ORF) of dAPRIL encodes a protein of 250-amino acid, containing a predicted transmembrane domain and a putative furin protease cleavage site like other mammalian APRILs. The amino acid identities between biologically soluble dAPRIL and its pig, human, rabbit and mouse counterparts are 91%, 86%, 88% and 86%, respectively, dramatically higher than most other known cytokines. The result