TNF肿瘤坏死因子的介绍.docVIP

肿瘤坏死因子（TNF） 1975年carswell等发现接种bcg的小鼠注射lps后，血清中含有一种能杀伤某些肿瘤细胞或使体内肿瘤组织发生血坏死的因子，称为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,tnf)。1985年shalaby把巨噬细胞产生的tnf命名为tnf-α ，把t淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin,lt)命名为tnf-β。tnf-α又称恶质素。1.tnf的产生（1）tnf-α是一种单核因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，lps是较强的刺激剂。ifn-γ、m-csf、gm-csf对单核细胞/巨噬细胞产生tnf-α有刺激作用，而pge则有抑制作用。前单核细胞系u937、前髓细胞系hl-60在pma刺激下可产生较高水平的tnf-α。t淋巴细胞、t细胞杂交瘤、t淋巴样细胞系以nk细胞等在pma刺激下也可分泌tnf-α。sac、pma、抗igm可刺激正常b细胞产生tnf-α。此外，中性粒细胞、lak、星状细胞、内皮细胞、平滑肌细胞亦可产生tnf-α。（2）tnf-β是一种淋巴因子，抗原和丝裂原均可刺激t淋巴细胞分泌tnf-β。pma刺激rpmi1788b淋巴母细胞可分泌高水平tnf-β。2.tnf的分子结构和基因（1）人的tnf-α基因长约2.76kb，小鼠为2.78kb，结构非常相似，均由4个外显子和3个内含子组成，与mhc基因群密切连锁，分别定位于第6对和第17对染色体上。1984年从hl-60、u937等细胞中克隆成功rhu tnf-α cdna，并在大肠杆菌中获得高表达。 人tnf-α前体由233个氨基酸残基组成，含76个氨基酸残基的信号肽，切除信号肽后成熟型tnf-α为157氨基酸残基，非糖基化，第69位和101位两个半胱氨酸形成分子内二硫键。rhu tnf-α分子量为17kda。小鼠tnf-α前体为235氨基酸残基，信号肽79氨基酸残基，成熟的小鼠tnf-α（rmutnf-α）分子量为17kda，由156个氨基酸残基组成，第69位和100位两个半胱氨酸形成分子内二硫键，有一个糖基化点，但糖基化不影响其生物学功能。rhu tnf-α与rmu tnf-α有79%氨基酸组成同源性，tnf-α的生物学作用似无明显的种属特异性。最近有人报道通过基因工程技术表达了n端少2个氨基酸（val、arg）的155氨基酸人tnf-α，具有更好的生物学活性和抗肿瘤效应。此外，还有用基因工程方法，将tnf-α分子氨基端7个氨基酸残基缺失，再将8pro、9ser和10asp改为8arg、9lys和10arg，或者再同时将157leu改为157phe，改构后的tnf-α比天比天然tnf体外杀伤l929细胞的活性增加1000倍左右，在体内肿瘤出血坏死效应也明显增加。tnf-α和β发挥生物学效应的天然形式是同源的三聚体。（2）人 和小鼠tnf-β基因分别定位于第6和第17号染色体。hutnf-β分子由205个氨基酸残基组成，含34氨基酸残基的信号肽，成熟型hu tnf-β分子为171个氨基酸残基，分子量25kda。rhu tnf-β分子由202氨基酸残基组成，包括33个氨基酸残基的信号肽，成熟分子169个氨基酸残基，与hu tnf-β有79%的同源性。hu tnf-β与hu tnf-αdna同源序列达56%，氨基酸水平上同源性为36%。3.tnf的受体（1）tnf-r的分型：tnf-r可分为两型：型tnf-r，55kda，cd120a，439氨基酸残基，此型受体可能在溶细胞活性上起主要作用；型tnf-r，75kda cd120b，426氨基酸残基，此型受体可能与信号传递和t细胞增殖有关。两型tnf-r均包括胞膜外区、穿膜区和胞浆区三个部分，胞膜外区有28%的同源，但在有包浆区无同源性，可能与介导不同的信号转导途径有关。tnf-r属于神经生长因子受体（ngfr）超家族。tnf-α和tnf-β的受体可能是同一的。tnf-r存在于多种正常及肿瘤细胞表面，一般每个细胞受体数目有103～104，如me-180肿瘤细胞系tnf-αr约2000/个细胞，kd为2*10-10m。不同细胞表面tnf-αr的数目和亲和力似乎与细胞对tnf-α的敏感性并不平行。tnf-α与相应受体结合后信号传递的机理尚不清楚，可能与活化蛋白激酶c（pkc），催化受体蛋白磷酸化有关。（2）可溶性tnfr：tnf结合蛋白（tnf-bp）是tnfr的可溶性形式，有stnf r（tnf-bpi）和stnfr（tnf-bp）两种。一般认为stnfr具有局限tnf活性，或稳定tnf的作用，在细胞因子网络中有重要的调节作用。seckiner 1988年发现发热患者尿中有tnf抑制物，分子量为33kda。olsson 1