NPM1突变基因表达抑制K562白血病细胞体外增殖与侵袭.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（１１）：６１０ ? ＮＰＭ１突变基因表达抑制Ｋ５６２白血病 细胞体外增殖和侵袭 邵会媛　苗宗玉　覃凤娴　陈先春　谭　诗　钟　梁　张　伶 （重庆医科大学医学检验系 临床检验诊断学教育部重点实验室 重庆市重点实验室　重庆　４０００１６） 摘要　核仁磷酸蛋白（ｎｕｃｌｅｏｐｈｏｓｍｉｎ，ＮＰＭ１）突变是近年发现的在急性髓系白血病中发挥重要作 用的基因改变，为探讨 ＮＰＭ１突变对 Ｋ５６２白血病细胞体外增殖和侵袭能力的影响，将载体 ｐＥＧＦＰＣ１ＮＰＭ１ｍＡ转染Ｋ５６２细胞系，构建稳定表达 ＮＰＭ１突变蛋白的白血病细胞株（Ｋ５６２ ｍＡ）。利用细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期进程改变；细胞粘附、 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验分别用以观察细胞体外粘附、迁移及侵袭能力。结果发现，ＮＰＭ１突变转染后 Ｋ５６２ 细胞体外增殖能力明显减弱；同时Ｇ１期细胞比例明显增高，Ｓ期细胞比例显著减低。与未处理组 和空载体转染组细胞相比，Ｋ５６２ｍＡ细胞体外迁移能力有所增加，但细胞粘附及侵袭能力却明显 减弱。提示ＮＰＭ１突变基因的表达能够抑制白血病细胞体外增殖和侵袭能力，为进一步深入探 讨ＮＰＭ１突变在白血病发生发展中的调控机制奠定了良好的基础。 关键词　白血病　核仁磷酸蛋白　突变　细胞增殖　细胞侵袭 中图分类号　Ｑ７８６ 　　ＮＰＭ１（ｎｕｃｌｅｏｐｈｏｓｍｉｎ，ＮＰＭ１）编码含有 １２个外显 胞，通过质粒转染 ＮＰＭ１基因 Ａ型突变体（ＮＰＭ１ 子的核磷蛋 白，是 目前急性髓细胞 白血病 （ａｃｕｔｅ ｍＡ），观察ＮＰＭ１ｍＡ对白血病细胞体外增殖和侵袭能 ［１］ ｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＭＬ）中突变率最高的基因改变 。 力的影响，进一步明确ＮＰＭ１突变在白血病发生中的 现已证实ＮＰＭ１突变除主要累及核型正常的ＡＭＬ患者 作用。 ［２］ ［３］ 外 ，还可累及骨髓增生异常综合征 、慢性髓细胞白 ［４］ １　材料与方法 血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ，ＣＭＬ）急变期 等血 液肿瘤。研究发现ＮＰＭ１突变可作为原癌基因与Ｅ１Ａ １．１　材　料 ［５］ 协同作用，诱导细胞恶性转化 ；同时ＮＰＭ１突变也可 ＴＭ １．１．１　试剂　ｘｆｅｃｔ转染试剂、ＲＮＡ提取试剂、ＲＴ ［６］ ［７］ 以通过调控ｐ５３及其依赖途径的活性 、增强ｃＭｙｃ ＰＣＲ试剂盒、引物合成均购于日本 ＴａＫａＲａ公司，胎牛 ［８］ 稳定性及其胞浆积累，协同ＦＬＴ３ＩＴＤ等基因 来促进 血清、ＲＰＭＩ１６４０培养液、Ｇ４１８购于美国Ｇｉｂｃｏ公司， 白血病细胞恶性增殖，提示ＮＰＭ１突变可促进白血病 小鼠抗人ＮＰＭ单抗购于美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，羊抗小 的发生发展。然而，临床资料显示伴有ＮＰＭ１突变的 鼠ＩｇＧ等组化试剂购于北京中杉金桥公司，人纤维连接 ［９］ 白血病患者对化疗药物敏感，无病生存期明显延长 ， 蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）、ＢＳＡ购于 Ｓｉｇｍａ公司，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ 提