发酵工程试验(一下,程庆佳,顾聚,九组)分析.ppt

发酵工程试验（一下，程庆佳，顾聚，九组） 主讲老师：张理珉，辅助老师：王绍辉 实验一 微生物发酵工程实验 一、实验结果及讨论： 本门课程的设置主要有以下几点目的： 1、进一步利用已具备有的实验技能，系统综合解决实验过程中的问题； 2、立足于多动手多训练，加强自主性； 3、加强实践性教学和创新意识的培养； 4、实验完成后能够达到一定自主解决实验过程遇到的问题的能力（包括其它研究中所涉及的问题），可以完成一些研究性实验工作； 5、初步积累一定自主实验的经验。 二、思考题 请设计从土壤中筛选谷氨酸产生菌的实验方案。 要求：从培养基配方设计说明，初筛、复筛等操作步骤，产物检测确认方法，用到的实验器材等几方面设计实验。 实验设计方案： 1、菌种分离： 培养基配方： （1）、苏氏合成培养基：葡萄糖2.0%，氯化铵0.4%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，碳酸钙0.5%，琼脂2.0%，PH7.0 （2）、丰富培养基：葡萄糖2.0%，蛋白胨1.0%，牛肉膏0.5%,酵母膏0.2%，氯化钠0.25%，琼脂2.0%,PH7.0 2、筛选 （1）、初筛： 培养基：葡萄糖5.0%，尿素1.0%,酵母膏0.2%，玉米浆0.2%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.04%，铁锰离子各两个2PPM，PH7.0 初筛方法：摇管法 步骤：①在大小合适的试管中装5ml发酵液，②在37度下振荡培养48小时，③对产物氨基酸和谷氨酸做测定，④挑选含量较高的菌株 （2）、复筛：仍旧采用上述培养基和上面的方法步骤 3、作正交试验 4、产物检测：对谷氨酸检测 将分离纯化得到的产物用常规的蛋白质水解法水解，用氨基酸分析仪分析水解后氨基酸的组成只出现了一个谷氨酸峰，证明产物是谷氨酸。 5、实验材料和器材 材料：采样土壤 器材：试管，三角瓶，刮子，接种环，接种针，吸管，棉花，酒精灯，培养箱，水浴锅，蛋白质水解酶，氨基酸分析仪。 实验二 柠檬酸产生菌的分离及筛选 一、实验结果及讨论： （直径单位：cm） 在此次试验中应注意器材的灭菌，在操作过程中在酒精灯旁进行。防止细菌（空气中）感染，在穿刺培养基过程中要挑取较好的菌株在酒精灯旁进行接种。 在耐酸选择性培养基中生长的菌落呈现黑白相间的颜色差异，有纯白色菌株和白色菌株上存在黑色孢子的菌株。鉴别性培养基上的穿刺接种的菌株，在平皿上呈圆形菌株，中间为白色菌株，而周围呈现黄色的变色圈。 二、思考题 1、黑曲霉柠檬酸产生菌菌株的富集应考虑利用哪些特点来进行富集？ 答：利用其酸、耐酸的特点进行富集，由于其能产酸必然是耐酸生长的，而其他酸在酸性条件下被抑制生长，因而可通过此法富集。 2、观察记录在察氏-加酸培养基平板上菌落生长情况。 答：10（-4）的培养基中，菌株生长的十分密集，彼此相互连接。 10（-5）的培养基中，菌株数量也是较多，但是较分散。 10（-6）的培养基中，菌株数量较少，并且不密集 菌株生长的颜色多为白色，有的无黑色孢子产生，有的则在白色菌株上长满黑色孢子，黑白相间。 实验三 还原糖及淀粉含量测定 一、实验结果及讨论： 在此次试验中，最主要的是滴定环节，首先要准确滴定出于预加液的含量，把滴定量规范在1ml以内，并且每次滴定之间的差距不得超过0.1ml，在滴定过程中还必须保障溶液沸腾，否则将影响正常反应的进行，使待测液颜色变化不正常，还有要准确的读取滴定管的滴定量程，保证数据的准确性，并且滴定速度要以4-5秒1滴的速度滴定，并在1分钟内完成 实验数据记录（标准葡萄糖液的消耗量ml ） 二、思考题 1、记录实验数据，并计算待测糖液的还原糖的浓度。 还原糖含量= C (V0-V)×10-3 (g) =1x（10.31-1.39）x 10-3 = 8.92x10-3 (g) 糖浓度 (g/L) =还原糖含量×稀释倍数 / (取样体积× 10-3) =8.92x10-3 x50/(2x10-3) =223(g/L) 2、斐林法定糖的测定原理？ 3、在还原糖测定实验中，“4个1”指的是什么？ 以4-5秒1滴的速度滴定 ；滴定在1分钟内完成；滴定消耗量葡萄糖量控制在1ml以内；每次滴定误差不超过0.1ml。 4、为什么要预先加入一定量的标准葡萄糖溶液？ 由于此反应是溶液在火炉上沸腾的过程中进行的，水分在不断的蒸发流失，所以必须遵守“4个1”的原则，在最短的时间内完成试验滴定并保证准确