口服脊髓灰质炎毒活疫苗(猴肾细胞).doc

脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸（猴肾细胞） Jisuihuizhiyan Jiandu Huo Yimiao Tangwan (Houshen Xibao) Poliomyelitis Vaccine in Dragee Candy (Monkey Kidney Cell), live 本品系用脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、III型减毒株分别接种于原代猴肾细胞, 经培养、收获病毒液后制成糖丸，用于预防脊髓灰质炎。 1 基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”要求； 2 制造 2.1 生产用细胞 生产用细胞为原代猴肾细胞。 2.1.1 细胞管理及检定 应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。 生产用猴肾细胞应选自用未作过其他试验或做过本疫苗检定的健康猕猴，所用动物须经不少于6周的隔离检疫，应无结核、B病毒感染及其他急性传染病，血清中泡沫病毒（foamy）抗体应为阴性。凡有严重化脓灶、赘生物以及明显的肝、肾病理改变者不得使用。 2.1.2细胞制备 取符合2.1.1项要求的健康猕猴肾脏，经胰蛋白酶消化、分散细胞，置37.0±0.5℃培养6～9天长成单层。每只猴制备的细胞为1个细胞消化批，同一天制备的细胞消化批为1个细胞批。 2.2 毒种 2.2.1 名称及来源 生产用毒种为脊髓灰质炎病毒I、II、III型减毒株，可用I、II、III型Sabin株、Sabin纯化株、中Ⅲ2株病毒或经批准的其他毒株。 2.2.2种子批的建立 应符合“生物制品生产和检定菌毒种管理规程”规定。 2.2.2.1原始种子批 Sabin株原始毒种Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型及中Ⅲ2株均由毒种研制单位制备和保存。 2.2.2.2主种子批 除WHO赠送的Sabin株外，其他经批准的毒种由原始毒种在胎猴肾细胞或人二倍体细胞上传1～2代制成的成分均一的一批病毒悬液称为主种子批。 Sabin株主种子批的传代水平为SO+1； 中Ⅲ2株主种子批传代水平为中III2 1代；Ⅲ型pfizer株主种子批为RSO1。 2.2.2.3工作种子批 主种子批毒种在原代胎猴肾细胞或人二倍体细胞上传l代制备成的成分均一的一批病毒悬液称为工作种子批。 2.2.3毒种传代 从原始种子批到生产种子批的传代次数，SabinⅠ、Ⅱ型和其他纯化株以及中Ⅲ2株不得超过3代；SabinⅢ型及其他纯化株包括pfizer株不得超过2代。 制备生产用种子批所用的细胞应限于原代胎猴肾细胞或人二倍体细胞。 2. 2 .4种子批的检定 除另有规定外，主种子批及工作种子批应进行以下全面检定2.2.4.1 鉴别试验 取适量Ⅰ型、Ⅱ型或III型单价脊髓灰质炎病毒抗血清与适量病毒供试品混合，置3537℃中和1－2小时，接种猴肾细胞、Hep-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度(35～36℃)培养，7天判定结果，病毒型别应准确无误。同时设血清和细胞对照，均应为阴性。病毒对照应为阳性。 2.2.4.2 病毒滴定 采用微量细胞病变法。取毒种作10倍系列稀释，每稀释度病毒液接种猴肾细胞、Hep-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度（35～36℃）培养，7天判定结果。病毒滴度均应不低于 6.5Lg CCID50／ml。应同时进行病毒参考品滴定。 2.2.4.3 无菌检查 依法检查（附录XII A）， 应符合规定。 2.2.4.4 支原体检查 依法检查（附录XII B）， 应符合规定。 2.2.4.5 病毒外源因子检查依法检查（附录XII C）， 应符合规定。 2.2.4.6家兔检查 毒种液应进行此项检查，如不立即进行试验，毒种液应保存于-20℃以下。取体重为1.5～2.5kg的健康家兔至少5只，每只注射10ml，用其中1.0ml皮内多处注射，其余皮下注射，观察3周。到期存活动物数应不低于80％，无B病毒和其他病毒感染判为合格。家兔在24小时以后死亡，疑有B病毒感染者应尸检，须留神经组织和脏器标本待查，用脑组织作10％悬液，用同样方法接种5只健康家兔进行检查。 2.2.4.7 免疫原性检查 用主种子批毒种制成疫苗，按常规接种易感儿童（免前抗体效价＜1:4） 至少30名，分别于免疫前及免疫后4周采血，测定中和抗体，免疫后抗体阳转率应不低于95％。 2.2.4.8 猴体神经毒力试验 依法检查（附录 XI L）， 应符合规定。 2.2.4.9 rct特征试验 将单价病毒液分别于36℃±0.1℃及40℃±0.1℃进行病毒滴定，试验设t-对照（生产毒种或已知对人安全的疫苗）。如果病毒液和t-对照在36℃±0.1℃的病毒滴度与40℃±0.1℃的滴度差不低于5.0 Lg，则 rct特征试验合格。 2.2.4.10 SV40核酸序列检查 依法检查（附录IX H）， 应为阴性。 2.2.5 毒种保存 液体