武夷菌素高产菌株的选育.pdfVIP

维普资讯 中国生物防治 ChineseJournalofBiologicalControl 2007年 5月 武夷菌素高产菌株的选育 付月灵 ，张克诚 ，石义萍 ，谭万忠 (1．中国农科院植物保护研究所 ／植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100094；2．西南大学植物保护学院) SelectionoflIigh-yieldProducingStrainofWuyiencin FU Yue—ling，ZHANG Ke—cheng，SHIYi—ping，TAN Wan—zhong (StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesnadInsectPests，InstituteofPlantProtection， CAAS，Beijing100094，China) 关 键 词：武夷菌素；亚硝基胍；离子注入；诱变 中图分类号：$482．28 文献标识码 ：A 文章编号：1005—9261(2007)02—0195—03 武夷菌素(Wuyienc~n)是从不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar．wuyien— s)产生的一种农用抗生素，其主要成分A是具有胞昔骨架的新型核苷类抗生素_1j。武夷菌素 对多种农作物病害有较好的防治效果，如黄瓜 白粉病、番茄叶霉病、灰霉病、黄瓜黑星病等 。随 着人民生活水平的提高和食品消费档次的不断上升，人们对绿色食品的需求量将逐渐加大，武 夷菌素 由于具有高效低毒、易分解、无残留、不污染环境等特点，将具有更大的市场和广阔的应 用前景。但 目前武夷菌素产生菌的效价较低 ，不利于推广和使用。为了选育出遗传性状稳定 的优 良菌株，提高单位效价，降低生产成本，曾洪梅等_2]曾对武夷菌素进行了诱变育种 。作者 对 目前生产上使用的高产菌株 S-40(2788ug／m1)，分别采用亚硝基胍和低能碳离子注入 的方法 进行诱变处理，开展了一系列筛选试验，从突变菌株中筛选到了高产 、稳定菌株。 1 材料与方法 1．1 供试菌株 武夷菌素产生菌s一40、生物测定菌深红酵母菌(Rhodoiorularubra)和枯草芽孢 杆菌(Bacillussubtilis)均由中国农业科学院植物保护研究所生物农药组保存。 1．2 单孢子悬浮液的制备 取一支长有新鲜 s一40菌株的 1％酵母膏斜面，加入9ml无菌水， 用接种环刮取培养基表面孢子 ，使孢子悬浮。将此粗制孢子悬液加入装有脱脂棉的试管过滤 ， 分开孢子链和单个孢子 ，过滤液 即为单孢子悬浮液。NTG诱变处理时用 pH8．0的0．05mol／L TM缓冲液_3j，低能碳离子注入用生理盐水稀释。 1．3 诱变处理 1．3．1 亚硝基胍 (NTG)诱变 取新鲜 s一40菌株单孢子悬浮液离心沉淀后重新悬浮于适量 0．05mol／LTM缓冲液 中，然后加入到装有 NTG的无菌离心管中，NTG终浓度为 2．4mg／ml。 收稿 日期 ：2OO6．08．28 基金项 目：科技部农业科技成果转化项 目(05EFN216900354)． 作者简介 ：付月灵(1984一)，女，研究生；*通讯作者：Tel：86．010E-mail：zhangkecheng@sina．corn。 l95 维普资讯 中 国 生 物 防 治 第 23卷 30~C条件下振荡2h，4000r／min离心 10min，孢子沉淀 ，弃去上清 ，立 即把孢子重新悬浮在无菌水 中，并将孢子悬浮液稀释成不 同浓度 。摇匀后涂皿 。采用 的涂菌法为 ：先将约 25ml1％酵母 膏培养基倒入灭过菌的培养皿 中，再将稀释好的孢子悬液按 0．1ml／llI[均匀涂布于冷却的 1％