山东寿光地区番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

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2017-06-13 发布于山东
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山东寿光地区番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdf

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中国蔬菜 2012（6）：35-40 CHINA VEGETABLES 山东寿光地区番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 11 1*1* 22 11 11 33 11 1*1* 22 11 11 33 乔乔宁宁李美芹李美芹郭宝太郭宝太刘永光刘永光裴华丽裴华丽竺晓平竺晓平乔乔宁宁李美芹李美芹郭宝太郭宝太刘永光刘永光裴华丽裴华丽竺晓平竺晓平 1 2 （潍坊科技学院蔬菜花卉研究所，山东寿光 262700；青岛农业大学生命科学学院，山东青岛 266109；3 山东农业大学植物保护学院，山东泰安 271018）摘要：利用双生病毒简并引物 PA/PB，对山东寿光地区保护地疑似感染番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）的番茄植株进行 PCR 检测，结果证明番茄病叶由 TYLCV 侵染所致。以提取的病叶总 DNA 为模板，扩增得到长约 770 bp 的 TYLCV-CP 基因片段，克隆至 pEASY -T1 Simple 载体，然后用 Xho I 和 EcoR I 将其切下并插入到 pET-32a 表达载体中，构建了寿光地区 TYLCV 分离物的外壳蛋白基因原核表达载体，转入大肠杆菌 BL21（DE3），经 IPTG（异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷）诱导获得了 50 kD 重组蛋白，Ni2+ -NTA 亲和层析纯化和 Western 印迹分析证明目的蛋白为 TYLCV 外壳蛋白，且具有良好的抗原活性。关键词：番茄黄化曲叶病毒；外壳蛋白基因；基因克隆；原核表达中图分类号：S436.412.1+ 1 文献标识码：A 文章编号： 1000-6346（2012）06-0035-06 Cloning of Coat Protein Gene of Tomato Yellow Leaf Curl Virus Strain from Shouguang Region of Shandong Province and Its Expression in E. coli BL21 （DE3 ） 1 1* 2 1 1 3 QIAO Ning ，LI Mei-qin ，GUO Bao-tai ，LIU Yong-guang ，PEI Hua-li ，ZHU Xiao-ping 1 （Institute of Vegetables and Flowers ，Weifang College of Science and Technology，Shouguang 262700 ，Shandong ， 2 3 China； College of Life Science，Qingdao Agricultural University ，Qingdao 266109 ，Shandong ，China； College of Plant Protection ，Shandong Agricultural University ，Tai’an 271018，Shandong ，China ） A