DRG急性分离PPT.pdfVIP

适用于膜片钳记录的大鼠背根神 经节(DRG)细胞急性分离方法 DRG的解剖部位 神经节是功能相同的神经元在 中枢以外的周围部位集合而成 的结节状构造。 表面包有一层结缔组织膜，其 中含血管、神经和脂肪细胞 ， DRG的位置并非恒定，它可位 于椎管内、椎间孔内或椎间孔 外 ，这取决于其所在的阶段水 平，但均临近椎间孔部位。 DRG的功能 • DRG位于脊神经的后根，其内富 含许多初级感觉神经元的胞体和 疼觉神经纤维，负责将伤害感受 信号等外周信息传入脊髓背角， 完成初级感觉信息的传递，是躯 体和内脏感觉信号中枢途径的第 一站，也是感觉信息初加工处理 的部位； • 该部位的受体、神经递质及离子 通道已成为疼觉研究及新型镇疼 药物开发的重要靶点。 DRG的神经元类型 • DRG细胞根据直径的大小可分 为大、中、小三类，以大鼠为 例，大细胞直径35-75 um甚至 更大，中细胞直径20-35 um, 小细胞直径10-20 um.其中， 中小细胞传递的信息与疼觉密 切相关。 主要仪器 1. CO 培养箱 2 2. 超净工作台 3. 电子天平 4. PH计 5. 离心机 6. 恒温水浴箱 7. 冰箱 8. 剪刀、镊子、精细角膜剪、油丝镊等手术器械 9. 解剖显微镜 10. 不同口径的热抛光的玻璃吸管 11.蒸汽压力消毒锅 12. 35 mm塑料培养皿 13. 0.22 um微孔滤膜 主要试剂 1. DMEM/F12培养基 GIBCO 2. HEPES Sigma 3. 马血清 Hyclone 4. 胎牛血清 Hyclone 5. 胶原酶 Type 1A Sigma 6. 胰蛋白酶 1：250 Amresco 7. 胰蛋白酶抑制剂 TypeⅡ-s Sigma 8. L-多聚赖氨酸 Sigma 9. 青霉素 80万单位/支 10.链霉素 100万单位/支 11.解剖显微镜 溶液的配制 1. 多聚赖氨酸（0.1 mg/ml) ：称取多聚赖氨酸25 mg溶于250 ml双蒸水中，用0.22 um 微孔滤膜过滤灭菌，保存于4 ℃。 2. 青链霉素储备液：取青链霉素80万单位溶于20