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AAV在肺部的应用腺相关病毒（AAV）属于依赖病毒属，细小病毒亚科，是一类自然缺陷的单链DNA病毒。野生型AAV基因组约4.7kb，含有rep和cap基因以及两端的ITR序列。尽管人类对AAV易感，但临床还并未发现与AAV相关的疾病。根据AAV衣壳蛋白基因的变异，可将AAV分为不同的血清型。不同血清型的AAV具有不同的组织特异性。将兴趣基因取代rep和cap基因构建一个两段带有ITR的载体，并将rep和cap置于一个独立的载体上，加上带有腺病毒辅助基因载体，便可包装出带有兴趣基因的重组腺相关病毒（rAAV）。目前rAAV已被广泛作为基因转导载体使用，rAAV在人体实验中的安全性也已被证实。早在1996年，科学家们就选择肺作为rAAV的第一个靶向实验器官。下面我们旨在介绍rAAV在肺部实验中的启动子、血清型的选择，及其小鼠肺部的AAV注射方法。启动子的选择根据不同的注射方式和实验目的，可选择不同的启动子以提高肺部表达效率。CMV在启动真核基因表达方面具有极高的效率，可高效感染小鼠肺部；CAG同样具有出色的感染气道的能力。Vigene提供适用于肺部的启动子应用CMV颈静脉注射AAVCAG鼻内滴注法感染AAV，AP染色小鼠气道血清型的选择研究表明，针对肺部感染rAAV在血清研究表明，针对肺部感染rAAV在血清型上的选择根据动物模型的不同而存在差异，主要体现在小鼠及较低等灵长类动物与高等灵长类动物中之间。在小鼠及一些较低等的灵长类动物中，AAV5及AAV6是感染肺部的最佳选择。血清型感染表面感染部位及水平受体rAAV2基底层远大于表层气道细胞：低水平或无肺泡细胞：低水平或无支气管上皮：低水平或无气道平滑肌：中等水平硫酸肝素（Heparin Sulfate）rAAV5基底层大于表面层气道细胞：中等水平肺泡细胞：中等水平PDGFR，2-5联唾液酸受体rAAV6表层气道细胞：中等水平肺泡细胞：高等水平支气管上皮：中等水平气道平滑肌：低等水平唾液酸糖蛋白rAAV9基底层和表层气道细胞：低等水平肺泡细胞：中等水平半乳糖基葡聚糖针对高等灵长类动物，AAV1对肺部的感染效率更高；而在肺癌的研究中，我们推荐AAV血清型选择如下：种类AAV血清型推荐小鼠与低等灵长类动物肺部AAV5/AAV6高等灵长类动物肺部AAV1肺癌AAV2（或慢病毒）小鼠肺部AAV注射方法AAV感染肺部有多种方法，较为常用的方法为鼻内滴注、气管插管、气管内注射等。当对肺部感染AAV的特异性要求较低时，也可采用静脉注射的方法；当进行肺癌成瘤实验时，也可采用瘤内注射的方式。在此，我们针对鼻内滴注、内镜辅助口腔气管插管术及气管内注射进行介绍。鼻内滴注法鼻内滴注法是一种直接的AAV感染法，操作简单且对设备要求低，对新手实验员也同样适用。缺点是AAV颗粒容易沉积在上呼吸道（鼻道、鼻窦和咽）和胃肠道，如果需要有效地感染到下呼吸道，则可能需要更大剂量的AAV才能实现。腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉；（动物必须处于足够深的麻醉状态以防止运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽）（2）将小鼠以背卧姿势固定在啮齿动物工作台上；（3）将门牙环置于小鼠上门牙上，并将尼龙搭扣连接到啮齿动物工作台下表面的相应尼龙搭扣上；（4）慢慢地将AAV悬液通过小鼠鼻孔内壁逐滴滴入，为保证最大地肺部感染效率，最小体积为50μL（每个鼻孔25μL），最大体积为75μL（每个鼻孔37.5μL）。待小鼠呼吸恢复正常后，再滴入一次75μL的AAV悬液；（5）将小鼠轻轻从工作台拿下，并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高，以保证小鼠顺畅的呼吸；（6）小鼠苏醒后，放回鼠笼。内镜辅助口腔气管插管术口腔气管插管术能够将病毒载体直接灌输入肺中，却没有外科手术的风险，并且避免了上呼吸道的病毒颗粒的损失。由于几乎所有AAV病毒颗粒都会到达肺内，所以要严格控制AAV的使用量。同时，与鼻内滴注法相比，口腔气管插管术需要一些特殊设备，操作起来也稍有难度。腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉；（动物必须处于足够深的麻醉状态以防止运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽）将小鼠以背卧姿势固定在啮齿动物工作台上；将门牙环置于小鼠上门牙上，并将尼龙搭扣连接到啮齿动物工作台下表面的相应尼龙搭扣上；小鼠的背部应完全平放在工作台上，胸部不应偏向两侧，并用尼龙扣完全固定；用尖头棉棒把小鼠的舌头卷起；轻轻地把附有耳镜的插管镜插入喉咙深部的气管开口处（大约在耳朵前部），插管镜的凹面应远离舌头；轻轻移动耳镜直到可以看到喉部（有时需稍微旋转镜子，以获得最佳视野）；操作时需注意动作幅度要小，如果只能看到舌头背面，则需重新移出从头开始操作；当可以看清喉部时，便可加入一滴2%的利多卡因，在插管前，插管镜可移出（小于30s），在此期间要定位导管针；30秒以后，重复步骤（3）—（5），重新插入插管